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时间:2020-06-06
《高分辨率熔解曲线分析法检测食源性副溶血性弧菌.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2013,Vo1.29,No.9。___IL—同Cj分辨率熔解曲线分析法检测食源性副溶血性弧菌章丽’,余以刚,赖富饶’,吴晖’,杨锡洪,肖性龙’(1.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640)(2.广东温氏佳润食品有限公司,广东云浮527400)摘要:为建立一种快速鉴定副溶血性弧茵的HRM(高分辨率熔解曲线)real-timePCR法,以toxR为靶基因,结合特异性引物,通过优化反应体系殁条件,进行特异性、敏感性及重复性评价,并初步应用于90份送检的鲜活
2、海产品样本的检测。特异性谈脸表明,该方法能选择}生检测副溶血弧菌,T值为76.64i~0.57℃;而与创伤弧菌、霍乱弧茵、金黄色葡萄球菌等多种海产品中常见的食源性病原菌没有交叉反应。灵敏度试验表明,该方法最少可检测toxR重组质粒的浓度为3.50xl02copies/mL。重复性试验表明,同一样品于试验内及试验问的平均Tm值分别为76.53:~-0.35℃和76.74~-0.52℃,变异系数分别为0.56~-0.42%和1.1li-0.73%。对90份鲜活海产品样本的检测证实该法可使阳性检出率从国标法的14.44~/d~高至18.8
3、9%。本研究所建立的副溶血性弧菌HRMreal-timePCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能应用于食品样本的检测,具有很好的研究价值和应用前景。关键词:副溶血J}生J弧菌;高分辨率熔解曲线;检测;实时PCR;荧光文章篇号:1673.9078(2013)9.2288-2293RapidDetecti0n0fVibrioparahaemolyticusbyReal··timePCRusingHighResolutionMeltingCurveAnalysisZHANGLi~YUYi-gang,LALIFu.rao,WUHu
4、i~,,YANG)【i-]H0ng2,ⅪoXing-long(1.CollegeofLightIndustryandFoodScience,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510640,China)(2.GuangdongWlen’sCarenFoodCo.,Ltd.,Yhnfu527400,China)Abstract:Arapidreal-timePCRme~odfordetectingHbHoparahaemolyticus(byhighresolutionmeltingcu
5、rveanalysis(HRM)wasdeveloped.ApairofspecificprimerstargetingthetoxRgeneofHbrioparahaemolyticuswasused.Afteroplimizingthereactionsystemandconditions,thespecificityofthemethodwasvalidatedwith10targetsl/'al~and10non-targetswains,Serialdilutionsfrom3.50x10to3.50~107copies/
6、mLpurifiedconstructedplasmidswereanalyzedtoevaluationitssensitivity.Reproducibilityassaywasalsoconductedonpurifiedconstructedplasmidsbetween1.50~10and1.50x10’copies/mL.Themethodwasappliedtodetect90livesubmittedseafoodsamples.TheresultsshowedthatthedevelopedHRMreal-time
7、PCRassayhadagoodspecificitybydetectingonlyVPwiththevalueof76.64~-0.57℃andwasnotafectedbyotherseafoodpathogenssuchasHbHovulnifcus,Hbriocholerae,Staphylococcusaureuseta1.ThesensitivityofdetectionoftheconstructedplasmidsWgl"e3.50~102copies/mL.Inaddition,theassayhadahighre
8、producibilityandtheaverageTmvalueswere76.53士o.35℃and76.74-4-0.52℃.Thesample’svariations(CVs)were0.56:~0.42%and1.11:~0
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