缺氧环境下A549细胞促进人脐静脉内皮细胞迁移及血管形成.pdf

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1、2014年3月第13卷第2期http：／／www·179··论著·缺氧环境下A549细胞促进人脐静脉内皮细胞迁移及血管形成胡赞李敏胡成平莫贵艳顾其华‘1中南大学湘雅医院呼吸内科(湖南长沙410008)；2长沙市中心医院呼吸内科(湖南长沙410004)【摘要】目的研究在缺氧条件下A549细胞对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移及微血管形成的影响。方法A549细胞在常氧组(21％O：)、缺氧组(2％O)、无氧组(0％O)中培养24h后，通过倒置相差显微镜观察细胞形态、MTr法检测细胞增殖、免疫细胞化学技术检测细胞内低氧诱导因子la(HIF·la)蛋白量以确定缺氧模型建立是

2、否成功。随后取常氧组、缺氧组的A549细胞上清液、HUVEC细胞培养液干预HUVEC，用细胞划痕实验、微丝绿色荧光染色方法观察各组HUVEC的迁移情况及伪足形成，体外HUVEC三维培养技术观察血管形成情况。结果与常氧组比较，缺氧组A549细胞的生长状态好，增殖明显；无氧组A549细胞生长状态差，细胞数量减少；缺氧组及无氧组A549细胞均有HIF—let表达，且缺氧组表达更加明显。与细胞培养液干预组比较，缺氧上清液干预组和常氧上清液干预组A549细胞的HUVEC均有不同程度的迁移、伪足结构形成及血管管腔样结构形成，且前者较后者明显。结论缺氧环境下A549细胞生长状态良好

3、，增殖明显，而无氧环境下则不利于A549细胞的生长。缺氧环境下A549细胞能促进HUVEC的迁移、伪足形成及血管形成。【关键词】低氧；A549细胞；人脐静脉内皮细胞；低氧诱导因子ld；迁移；伪足；三维培养技术A549CellsPromoteHUVECMigrationandAngiogenesisunderHypoxicConditionsHuZan．Min，HuChengping，MoGuiyan，GuQihua．DepartmentofRespiratoryMedicine，XiangyaHospital，CentralSouthUniversity，Changs

4、ha，Hunan，410008，ChinaCorrespondingAuthor：HuChengping，E—mail：huchengp28@126．con【Abstract】ObjectiveToobservetheefectsofA549cellsunderhypoxicconditionsonthemigrationofhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)andmicrovascularformation．MethodsAfterculturedfor24hinnormoxiacondition(21％O2)，hy

5、poxiacondition(2％O2)，andanaerobiccondition(O％O2)，respectively，morphologyofA549ceilswasobservedwithinve~edphasecontrastmicroscope，proliferationWasdetectedbyMTTassay，andintraeellularhypoxia-induciblefactor一1Of(HIF-1仅)proteinwasdetectedbyimmunocyto-chemicaltechnique，fordeterminingwhetherth

6、ehypoxiamodelissuccessfu1．ThenA549cells’supematantinthenormoxicgroup．thehypoxiagroupandHUVECsculturemediumweretakentointerveneHUVECs．ThemigrationofHUVECswasobservedwithcellscratchtest，pseudopodiaformationofHUVECswasobservedwithmicrofilamentgreenfluorescentstainingmethod，andbloodvesselfo

7、rmationwasobservedwiththree-dimensionalculturetechniquesinvitro．RemitsComparedwiththenormoxicgroup，thegrowthofA549cellsWasbetterinthehypoxiagroupwithmoreproliferation，andwaspoorintheanaerobicgroupwithdecreasednumberofceUs．A549cellsinthehypoxiagroupandtheanaerobicgroupbothexpres