雏鸭混合感染基因A型和基因C型鸭甲肝病毒研究.pdf

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1、第40卷第2期l西南民族大学学报‘自然学版JourflaofSouthwestUniversityforNationalitiesNaturaScienceEditionMa20l4l·turaldoi：lO3969~．issn．1003-4271．20I4．02．06雏鸭混合感染基因A型和基因C型鸭甲肝病毒研究马静，汤承，岳华(西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都6l0041)摘要：研究了20l3年四川地区某鸭场暴发的基因A型鸭甲肝病毒(DHAV．A)和基因C型鸭甲肝病毒(DHAV．c)的混合感染病例．疾病发生于

2、20～25日龄雏鸭，发病率25％～30％，死亡率为20％～30％，，临死前出现明显的神经症状，病死雏鸭肝脏肿大．出血．利用双重RT．PCR从病死雏鸭的肝脏组织中同时检测出DHAV—A和DHAV．C．这是四川省养鸭密集区第一次发现雏鸭混合感染DHAV．A和DHAV．C的情况．此外，对2009～2012年四川省各养鸭密集区鸭甲肝炎流行情况做了调查．一共从四川省养鸭密集区采集312份疑似鸭肝炎样本中检测出l20份鸭甲型肝病毒性肝炎．其中基因C型鸭肝炎阳性率为75％，基因A型鸭肝炎仅为25％，未发现基因A型和基因c型混合感染情

3、况．结果说明2009～20l2年我省鸭病毒性肝炎以基因c型鸭甲肝病毒为优势病原．2013年，开始出现DHAV—A和DHAV．C混合感染病例．因此如何采取有效措施应对其危害，这应该引起养鸭界及相关部门的高度重视．关键词：A型鸭甲肝病毒；C型鸭甲肝病毒：混合感染：流行病学调查中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1003—4271(2014)020l92—05鸭病毒性肝炎(Duckviralhepatitis，DVH)是鸭肝炎病毒(Duckhepatitisvirus，DHV)~JI起的雏鸭的一种传染病，它以发

4、病急、传播迅速、肝脏发生病变和死亡率高为主要特点⋯．DHV由星状病毒科和小RNA病毒科成员组成，其中I型DHV(DHV-1)属于小RNA病毒科，同时又被重新命名成鸭甲型肝炎病毒(DuckhepatitisAvirus，DHAV)，而Ⅱ型DHV(DHV-2)和Ⅲ型DHV(DHV-3)都被划分成星状病毒科i．根据基因组的进化分析，DHAV又被分为3个基因型，基因A型(DHAV-A)、基因B型(DHAV-B)和基因C型(DHAV-C)，分别对应原有的DHV-1、从台湾分离的NDHV和从韩国和中国分离的NDHV．其中DHAV-

5、A和DHAV-B之间无血清交叉反应，而DHA_V．A和DHAV-C仅存在有限的血清交叉中和反应_oJ．本实验室从疑似暴发肝炎的某鸭场病死雏鸭肝脏中分离出3株病毒，经双重RT-PCR方法鉴定及遗传进化分析，确定为DHA＼，-A和DHAV-C混合感染．此外，本实验采用双重RT-PCR方法对四川省养鸭密集区采集的3l2份疑似鸭肝炎样本进行检测，结果显示，120份病料检测出鸭甲肝病毒，其中基因C型鸭甲肝病毒占75％，基因A型鸭甲肝病毒仅占25％．1材料与方法1．1病料1．1．1四川省资阳市疑似暴发鸭肝炎疾病的某鸭场送检的3只2

6、5日龄病死雏鸭．同时在同一鸭场选取3只25日龄未发病的花边鸭．1．1．22009年～2012年四川省养鸭密集区采集疑似鸭肝炎肝脏样本3l2份．-1．2主要试剂TrizolRNA提取试剂盒购自Invitrogen公司；反转录试剂盒购自上海博瑞克公司；DNAMakerI购自Tiangen公司；TaqDNA聚合酶购和pMD19．Tvector试剂盒购自TaKaRa公司；大肠杆菌DH5a感受态细胞和胶回收试剂盒购自北京天根生物有限公司；其它试剂为国产分析纯．1．3主要仪器收稿日期：20l3．1l。0l通讯作者：岳华(1963一

7、)，女，教授，E—mail：yhua900@163．corn．基金项目：“十二五”高技术研究发展计划项目(2012AA101304)第2期马静等：雏鸭混合感染基因A型和基因C型鸭甲肝病毒研究l93高速离心机centrifuge5804(Eppendorf~_}司，德国)：隔水式恒温培养箱(齐欣公司中国上海)：核酸蛋白检测'[Y．DU800(Beckman公司美国)：PCR仪：mycyclerTM，Bio—Rad公司美国：凝胶成像系统：Doc2000，BioRad公司，美国：恒温水浴器(国华电器，中国江苏)：超纯水仪Mi

8、lli—Q(Millipore公司，法国)；移液器(Eppendorf~司，德国)．1．4方法1．4．1样本采集分别无菌采集死亡和健康雏鸭以及送检样本的肝脏组织剪碎后立即放入液氮中，待样本完全冷冻后转入一80℃冰箱保存．1．4．2组织总RNA的提取及cDNA的合成．根据Tfizol说明书分别提取雏鸭肝脏组织总RNA和采集样本肝脏总