基因C型鸭甲肝病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立.pdf

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1、第37卷第3期中国预防兽医学报Vo1．37．NO．32015年3月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMar．2015doi：10．3969~．issn．1008-0589．2015．03．12基因C型鸭甲肝病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立何美琳，张焕容，程方明，杨晓农1,2，岳华，f1．西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041；2．西南民族大学动物医学四川I省高等学校重点实验室，四川成都610041)摘要：为建立检测基因c型鸭甲肝病毒(DHAV．c)血清抗体的方法，本研究以纯

2、化的DHAV．C作为包被抗原，抗DHAV．C单克隆抗体(MAb)5E3—9与待检血清竞争结合抗原，采用方阵法确定包被抗原、MAb及待检血清的最佳工作浓度，经过对反应条件的优化，建立了DHAV．C抗体的竞争ELISA检测方法。该方法仅对DHAV—C血清检测为阳性，与DHAV．A、鸭圆环病毒、鸭乙型肝炎病毒等相关病原的鸭阳性血清无交叉反应。敏感性试验表明，标准阳性血清1：128倍稀释时，检测结果仍为阳性，比中和试验灵敏性更高。批内批间变异系数分别为4．64％～5．21％和6．02％～8．68％，具有良好的重复性。与中和试验比较，阳性符合率为100％

3、(15／15)，阴性符合率为77．8％(14／181。本研究基于纯化的DHAV．C及其特异性MAb建立的MAb竞争ELISA检测方法可以用于DHAv．C流行病学调查以及抗体的检测。关键词：基因C型鸭甲肝病毒；单克隆抗体；竞争ELISA；抗体检测中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2015)03—02l1-05DevelopmentofacompetitiveELISAfordetectingantibodiesagainstgenotypeCduckhepatitisAvirusbasedonthemonocl

4、onalantibodyHEMei-lin，ZHANGHuan—rong，，CHENGFang—ming，YANGXiao-nong，，YUEHua’(1．CollegeofLifeScienceandTechnology，SouthwestUniversityforNationalities，Chengdu610041，China；2．KeyLaboratoryofVeterinaryMedicineofUniversityinSichuanProvince，SouthwestUniversityforNationalities，Chengd

5、u610041，China)Abstract：TheobjectiveofthisstudyistodevelopacompetitiveELISAtodetecttheantibodyagainstduckhepatitisAvirusgenotypeC(DHAV—C)．ThepurifiedDHAV-Cwasusedascoatingantigen，andDHAV—CspecificMAb5E3-9ascompetitiveantibodyagainstDHAV-Cantibody．Undertheoptimizedreactingcond

6、itions，including10mLpurifiedDHAV—Ccoatingantigen，1：800dilutionofMAb5E3—9dilutingthetestserl／mto1：2ratio，and1：5，000dilutionofHRPconjugatedgoatanti-miceIgGwiththepositivecut-ofvalueofinhibitionratio36．86％．Thespecificitytestshowedthattherewerenocrossreactionwithduckanti—seraofa

7、lltestedrelativepathogens，suchasduckhepatitisAvirusgenotypeA(DHAV—A)，duckcircovirus，duckhepatitisBvirusandother6pathogens．Thesensitivitytestshowedthat1：64dilutedDHAV—CpositiveseracouldbedetectedpositivewiththisdevelopedcompetitiveELISA．The15neutralizationtestdetectedpositive

8、serawereallpositivewhentheyweredetectedbythedevelopedcompetitiveELISA，while