草鱼SREBP-1基因的克隆及糖对其在肝脏中表达的影响.pdf

《草鱼SREBP-1基因的克隆及糖对其在肝脏中表达的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第38卷第8期水产学报Vo1．38，No．82014年8月JOURNALOFFISHERIESOFCHINAAug．，2014文章编号：1000—0615(2014)08—1057—11DOI：10．3724／SP．J．1231．2014，49223草鱼SREBP．1基因的克隆及糖对其在肝脏中表达的影响孙君君，卢荣华，杨峰，秦超彬，杨丽萍，王俊丽，孔祥会，李学军，聂国兴(1．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007；2．河南师范大学水产学院，河南新乡453007)摘要：固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是调控糖脂代谢相关基因表达的关键核转录因子。为获知草鱼SREBP一1

2、基因的序列及其在肝脏中的表达规律，本实验采用同源克隆和RACE方法获得了草鱼SREBP．1基因的部分cDNA序列，并通过生物信息学方法对该基因及所编码蛋白的结构特征进行了分析；采用实时荧光定量PCR技术，对SREBP一1基因在8种不同组织的表达规律及低糖(糖含量24％)和高糖(糖含量42％)投喂条件下肝脏中的表达水平进行了研究。结果显示，所克隆到的草鱼SREBP一1基因cDNA长4760bp，其中包括开放读码框3426bp，编码1141个氨基酸；草鱼SREBP一1具有一个典型的碱性螺旋一环一螺旋亮氨酸拉链结构(bHLH．zip)；氨基酸序列比对结果显示，草鱼SREBP一1与其他

3、鱼类的同源性在76％～88％之间，与斑马鱼的进化关系最近；草鱼SREBP．1基因在脑中的表达量最高，肝脏和肠次之，在肾脏、脾脏、肌肉、脂肪和性腺中均有少量表达；与对照组相比，SREBP一1基因在高糖诱导下表达量显著提高(P<0．05)，低糖诱导下没有显著性差异。研究表明，在高糖负荷条件下，草鱼肝脏中SREBP一1可能会促进糖的利用和转化，从而参与糖代谢调节过程，为丰富鱼类糖代谢调控机理提供研究资料，并有望为提高鱼类对饲料糖的利用效率提供理论依据。关键词：草鱼；SREBP一1；组织分布；糖代谢；基因表达中图分类号：Q786；S917．4文献标志码：A固醇调节元件结合蛋白(ster

4、olregulatory的表达进而调节机体的糖脂代谢过程。鱼类elementbindingproteins，SREBPs)是一类膜结合SREBP-1的研究尚不多见，仅在斑马鱼(Danio型蛋白质，属于碱性螺旋一环一螺旋亮氨酸拉链rerio)、大西洋鲑(Salmosalar)和金头鲷(Sparus(bHLH．zip)转录因子家族。在p$-~L动物中发现aurata)中研究显示SREBP一1和糖脂代谢有关，可SREBPs有3个亚型：SREBP一1a、SREBP一1C和调节脂肪酸合成或糖代谢相关基因的表达。。。SREBP．2。其中，前两者由同一个SREBP一1基因但SREBP．1基因

5、的具体功能和调节糖脂代谢的编码，而后者则由SREBP一2基因编码¨。现已证机理尚不清晰。明，SREBP．1是哺乳动物肝脏脂肪生成基因的主草鱼(Ctenopharyngodonidella)是我国特有的要调节者，能调节脂肪酸、甘油三酯和胆固醇合成淡水性鱼类，属于“四大家鱼”之一，生长快、肉质的30多个基因的表达。在患糖尿病的小鼠好，具有较高的经济价值。近几年来，随着养殖规中超表达SREBP一1可诱导肝脏中葡萄糖激酶模不断加大，生产中经常出现强化投饲、植物蛋白(glucokinase，GK)和脂生成酶基因的表达，并抑源替代鱼粉而导致碳水化合物含量过高以及饲料制糖异生途径关键酶——磷

6、酸烯醇式丙酮酸羧激营养组成不平衡等诸多问题，从而造成肝脏代谢障酶(phosphoenolpyruvatecarboxykinase，PEPCK)碍、肝脏脂肪大量蓄积、脂肪滴增大、肝功能下降等收稿日期：2014-04-03修回13期：2014-05-07资助项目：国家自然科学基金(31372545)；河南省教育厅科学技术研究重点项目(14A240002)通信作者：聂国兴，E—mail：niegx@htu．cahttp：／／WWW．scxuebao．cn水产学报症状。。”。提高鱼类对糖的利用可有效预防鱼类L，氨氮<0．01mg／L，光照周期为12L：12D。无菌的营养代谢性疾病和节

7、约蛋白源，因此，探讨调控条件下取肝脏，以液氮为介质，在研钵中将组织研草鱼糖代谢相关基因的作用，具有重要的理论价值磨成粉末状，按照RNAisoPlus说明书提取并纯化和实践意义，并为深入了解SREBP．1的功能及提总RNA。琼脂糖凝胶电泳法检测其完整性，超微高鱼类对糖类的利用提供理论依据。量分光光度计法检测其浓度和纯度。根据GenBank中已报道的鲤科鱼类的1材料与方法SREBP一1cDNA的保守序列，利用PrimerPremier1．1实验材料5．0生物软件设计5对特异性引物(表1)，全部用