Toll受体4的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系探讨.doc

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1、ToII受体4的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系探讨［摘要］目的探讨分析Toll受体4(TLR4)的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系。方法随机选取2013年1月一2015年4月胎膜早破病例30例(研究组)与正常a晚期妊娠女性30例(对照组)，分别测定胎盘组织TLR4定位、表达特点以及白介素-6(TL-6)、白介素-8(TL-8)水平，予以产后胎膜病理检查。结果2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4inRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)；研究组血清TL-8水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P0.05),TLR4mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，组织绒毛膜

2、羊膜炎者"-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，差异有统计学意义(P<0.05)。该组胎膜组织病理检查确认为亚临床型绒毛膜羊膜炎，三期急性炎性改变，I期、II、田期改变逐渐明显。结论TLR4上升以及TL-8上升均与绒毛膜羊膜炎有关联，TL-8变化关系到胎膜完整性，对TLR4的监测是防控胎膜早破、绒毛膜羊膜炎的关键。［关键词］Tol1受体4；表达；胎膜早破；绒毛膜羊膜炎［中图分类号］R4.433［文献标识码］A［文章编号］1674-0742(2015)07(a)-0001-03胎膜早破主要因感染所致，Toll样受体与固有免疫左右有直接关联，而TLRs作用于细胞信号转导等环节

3、，TLR4关系到内毒素信号传导过程，且可能与胎膜早破绒毛膜羊膜炎的发生有关［1］,该研究随机选取2013年1月一2015年4月胎膜早破病例30例为研究对象，探讨分析了TLR4与胎膜早破绒毛膜羊膜炎之间的关系，现报道如下。1资料与方法1.1一般资料随机选取2013年1月一2015年4月胎膜早破病例30例（研究组）与正常晚期妊娠女性30例（对照组），研究组年龄22〜34岁，平均年龄（26.8±2.4）岁；对照组年龄23~33岁，平均年龄（26.3±2.8）岁，其中15例孕周在28〜37周之间（对照1组），另15例孕周337周（对照2组）。2组基础资料对比差异无统计学意义（P>0.0

4、5）o1.2方法2组均在剖宫产之时剪取脐带附着处胎盘垂直断面中央标本2块，使用0.9%氯化钠溶液将标本漂洗干净，其中1块以液氮冷冻处理，置于-70°C环境中备用，另1块用来提取RNAo2组孕妇分娩前均常规抽取肘静脉血标本各5mL,高敏放射免疫测定标本中IL-6>IL-8水平，产后均在破口部分剪取胎膜组织标本，以10%甲醛固定送检。免疫组化。冰冻切片取出，厚度维持在10Um,并以冷丙酮固定处理、将内源性过氧化物酶去除。山羊血清与0.l%Trit.onX-100溶液通透细胞封闭处理。将兔抗人TLR2TgG抗体滴到切片之上，置于4C湿盒内一夜。取出后清洗，将生物素化山羊抗兔IgG/H

5、RP二抗滴入，二氨基联苯氨显色处理，显色后再以苏木素染色，梯度乙醇处理后脱水，封片。观察组织细胞结构变化，若结构依然完整，且发现棕褐色胞浆，胞核为蓝色阳性；细胞结构完整但胞核为蓝色，未见棕褐色胞浆，则胞核映衬下可见浅蓝色，判定为阴性细胞。检测胎盘组织TLR4的mRNAo组织标本置于冰盒，Trizol液研磨处理，将胎盘组织总RNA以Trizol一步法提取出来，逆转荥得到cDNA,将TLR2、TLR4引物加入并诱导扩增。分别在94°C环境下处理5min、30s,72°C环境下处理30s、54°C环境下处理30s,72°C延伸处理7min,进行PCR反应。参照2%琼脂糖快速电泳P-a

6、ctin,凝胶成像系统进行扩增产物分析。1.3诊断标准参照第8版谢幸主编的《妇产科学》诊断胎膜早破［2］。胎膜组织病理检查出现炎性反应，产前阶段或分娩后24h后测量体温在37.5°C之上,有高于标准值的白细胞计数，恶露有臭味；胎膜病理检测为炎性，即诊断为绒毛膜羊膜炎［3］。1.4统计方法采用SPSS16.0软件对该研究的数据进行统计学的分析，计量资料用(x±s)表示，对比应用t检验，P<0.05时，差异有统计学意义。2结果2.1TLR4表达情况2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4inRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)；研究组血清IL-6、IL-8水平明显高于对照组差

7、异有统计学意义(P<0.05)o见表1。最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例，TLR4表达水平差异无统计学意义(P〉0.05),TLR4mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，组织绒毛膜羊膜炎者"-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者差异有统计学意义(P<0.05)o见表2。1.3该组胎膜组织病理检查组胎膜组织病理检查确认为亚临床型绒毛膜羊膜炎，均采用I1E染色,图1为I期绒毛膜羊膜炎胎膜组织，图2为II期绒毛膜羊膜炎胎膜组织，图3为田期绒毛膜羊膜炎胎膜组织，三期绒毛膜羊膜炎胎膜组织均呈现出