活化的CREBH蛋白对脂肪酸诱导的脂肪变性肝细胞中C反应蛋白表达的调控研究.pdf

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1、华内代谢杂毒2014年2月第3O卷第2期ChinJEndocrinolMetab，February2014，Vo1．30，N0．2141··基础研究●活化的CREBH蛋白对脂肪酸诱导的脂肪变性肝细胞中C反应蛋白表达的调控研究赵雄艾罗燕苏大芝王晓晗江小柯许青青吴昌维陈志威范竹萍【摘要】目的建立脂肪酸诱导的脂肪变肝细胞模型，探讨活化的cAMP应答元件结合蛋白H(CREBH)蛋白对该模型中C反应蛋白表达的影响。方法给予L02细胞不同比例和浓度的油酸软脂酸混合液(2：1、1：2和0：3)，分别干预12和24h。CCK

2、一8法测定细胞活力。流式测定细胞内脂肪含量。实时PCR方法检测细胞内C反应蛋白、CREBH、C／EBP同源蛋白C／EBP(CHOP)和免疫球蛋白结合蛋白(BIP)mRNA表达水平变化。Western印迹法检测细胞核内活化的CREBH蛋白含量。RNA干扰靶向沉默CREBH蛋白后再分别采用混合脂肪酸干预24h。实时PCR方法检测细胞内C反应蛋白、CREBH、CHOP和BIPmRNA表达水平变化。结果(1)混合脂肪酸诱导肝细胞脂肪变。随着软脂酸比例的升高．细胞内c反应蛋白表达水平升高，并且具有时间依赖性。(2)混合

3、脂肪酸可以诱导CREBH表达升高(P

4、heexpressionofC．reactiveproteininfatty-acid．inducedsteat0tichepaticcellsZhaoXiong，AiLuoyan，．suDazhi，WangXiaohan，JiangXiaoke，Qingqing，WuChangwei，ChenZhiwei，FanZhuping．DepamentofHealthCareCenter，成Hospital，SchoolofMedicine，ShanghaiJiaotongUniversity．Shanghai20

5、0127．ChinaCorrespondingauthor：FanZhuping．Email：zhuping~fan@J．com【Abstract】ObjectiveToestablishasteatosishepatocytemodelinvitroandexploretheeffectofactivatedcAMP—responsiveelement—bindingproteinH(CREBH)proteinontheexpressionofC—reactiveprotein(CRP)inthismode

6、1．MethodsL02cellswereculturedwithfreefatty—acidfFFAmixturesatdifferentratiosofoleicacidandpalmiticacid(2：1，1：2，and0：3)for12or24htoinducefat—overloading．CellviabilitywasinvestigatedbyCCK一8，thelevelsofCRP，CREBH，C／EBPhomologousprotein(CHOP)，andimmunoglobulin—b

7、indingprotein(BIP)weredetectedbyreal、timePCR．Theleve1ofCREBHinnucleiwasdetectedbywesternblot．ThenCREBHsiRNAornegativecontrolsiRNAwastransfectedintoL02cells．andcuhuredwithFFAmixturesfor24hours．ThelevelsofCRP，CREBH，CHOP．andBIPweredetectedbyreal—timePCR．Result

8、s(1)CellscuhuredwithFFAmixturesshowedsignificantlyincreasedfatdropletscomparedwithcontrolgroup．ThelevelofCRPwasincreasedbyFFAmixtures，dependingontheproportionofpalmiticacid．(2)TheexpressionlevelsofCREB