吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制胆固醇诱导的人肝细胞c反应蛋白的表达

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1、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制胆固醇诱导的人肝细胞C反应蛋白的表达作者：唐俊利，徐海燕，刘喜平，钱民章【摘要】目的研究核因子κB(NF-κB)信号通路阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对胆固醇诱导的人肝细胞C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)表达的影响。方法培养肝细胞L-02并将其分为3个组，即胆固醇作用组、PDTC+胆固醇作用组和对照组，分别作用细胞48h。采用Westernblot和免疫比浊法分别检测细胞内和细胞培养液中CRP含量，比较有无PDTC作用下CRP表达量的变化。结果胆固醇能显著诱导人肝细胞C反应蛋白的表达(P<

2、0.05)，且其诱导效应随浓度增加而增强；加入PDTC阻断NF-κB信号通路后，胆固醇诱导人肝细胞CRP基因表达的作用减弱(P<0.05)。结论PDTC阻断NF-κB信号通路后，CRP表达量下降，提示NF-κB信号通路可能参与了胆固醇诱导CRP基因表达的过程。【关键词】C反应蛋白；胆固醇；动脉粥样硬化；核因子κB　　ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectsofPDTConcholesterolinducedC-reactiveproteingeneexpressioninL-02cellline.MethodsHuma

3、nhepatocytecelllineL-02wasculturedinvitro;growth-arrestedcellsweredividedinto3groups,10cholesterolgroup,PDTC+cholesterolgroupandcontrolgroup.After48hincubation,westernblotandimmunoturbidimetryassayswerecarriedouttodetectintracellularandsecretedCreactiveproteinexpression.ResultsCh

4、olesterolstimulatedCRPgeneexpressioninL-02(P<0.05)comparedwithnegativecontrolgroup;AfterPDTCapplication,CRPgeneexpressioninallthecholesteroldosagegroups(at6.25mg/L,12.5mg/L,25.0mg/L,50.0mg/L,respectively)decreasedsignificantly.ConclusionCholesterolinducedL-02CRPgeneexpression.

5、CRPgeneexpressiondecreasedsignificantlyafterPDTCapplication，whichindicatesthatNF-κBmightbeinvolvedinthecholesterolinducedC-reactiveproteingeneexpressioninL-02cellline.　　KEYWORDS:Creactiveprotein;cholesterol;atherosclerosis;nuclearfactorkappaB(NF-κB)动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)的发病机制

6、仍不完全清楚。脂质浸润学说认为As的发生与脂质代谢紊乱密切相关，胆固醇在As病变形成中起着重要作用，是致As的因素之一［1］。Ross教授［2］在其损伤反应学说的基础上明确提出“动脉粥样硬化是一种炎症性疾病”。C反应蛋白(C-reactiveprotein,10CRP)作为一种急性期反应蛋白，其水平增高是体内炎症的敏感指标。有研究发现CRP直接参与了动脉粥样硬化的发生和发展［3-5］。近年来的研究发现，血脂水平与血清CRP水平之间有着密切的关系。Ridker等［6］报道，血清总胆固醇升高时CRP也升高；Verhamme等［7］用减低脂质含量的饲料喂养高脂

7、血症的幼猪，4周后发现血脂和血清CRP水平都有显著降低，高胆固醇血症与血清CRP水平升高关系密切，但具体机制尚不明确。在本研究中，我们观察了胆固醇对体外培养的人肝细胞L-02CRP基因表达的影响，并在此基础上采用核因子κB(NF-κB)信号通路的阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)作用细胞，观察NF-κB信号通路是否参与了胆固醇诱导人肝细胞CRP基因表达的过程。　　1材料与方法　　1.1细胞及主要试剂　　L-02细胞株由武汉大学细胞保藏中心提供。RPMI-1640培养基购自Gibco公司；胎牛血清、CRP免疫比浊试剂盒购自华美公司；胆固醇、PDTC购

8、自Sigma公司；CRP标准品、IL-6等购自晶美公司；山羊抗人CRP一抗、兔抗