衔接蛋白p66Shc在高体积分数氧肺泡上皮细胞损伤中的作用.pdf

《衔接蛋白p66Shc在高体积分数氧肺泡上皮细胞损伤中的作用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、堡实用J科临床杂志2014年7月第29卷第14期ChinJApplClinPedi~tr，July2014，Vo1．29，No．14·1083·新生儿疾病·衔接蛋白p66Shc在高体积分数氧肺泡上皮细胞损伤中的作用郭琳董文斌车忠丽李清平康兰【摘要】目的检测衔接蛋白p66Shc在高体积分数氧(高氧)损伤的A549细胞中的表达，探讨二者之问的关系。方法在体外培养人A549肺泡上皮细胞系，随机分为对照组[置于含50mL／L二氧化碳(CO，)培养箱中]、高氧组[通入3L／min的900mL／L氧气(O)和50mL／LCO高纯混合气，10min后密闭培养]。倒置相

2、差显微镜观察24h后细胞形态变化，荧光显微镜测线粒体膜电位，细胞免疫组织化学检测24h后细胞中p66Shc蛋白的表达，并采用双变量相关分析法分析线粒体膜电位的变化与p66Shc蛋白表达变化二者之间的相关性。结果1．倒置显微镜下：与对照组相比，24h高氧组细胞形态变圆，间隙加大，活细胞数量明显降低，悬浮细胞明显增多。2．与对照组相比，24h后，高氧组A549细胞红色荧光减弱，绿色荧光增强。3．对照组A549细胞内p66Shc的表达为0．05766488±0．00651784，高氧组24h后A549细胞内p66Shc的表达为0．123600504-0．004

3、22723，高氧组较对照组明显增加，差异有统计学意义(t：一24．006，P<0．001)。4．膜电位的下降与p66Shc蛋白表达的增加呈负相关性(R=一0．998，P<0．001)。结论在高氧诱导的肺泡上皮细胞内，线粒体膜电位下降，p66Shc表达增多，二者呈负相关性，从而推测p66Shc可能参与人肺泡上皮细胞高氧损伤过程。【关键词】高体积分数氧；肺泡上皮细胞；衔接蛋白；氧化应激；凋亡Roleofadapterproteinp66Shcininjuredmediatingalveolarepithelialcellsinducedbyhyperoxia

4、GuoLin，DongWenbin，CheZhongli，LiQingping，KangLan．DepartmentofNeonatology，theAffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege，Luzhou646000，SichuanProvince，ChinaCo~espondingauthor：DongWenbin，Email：DongWenbin2000@163．con【Abstract】ObjecfiveTodeterminetheexpressionofadapterproteinp66Shcinmedia

5、tingalveolarepithelialcellsinducedbyhyperoxiaandtoexploretheirrelationship．MethodsA549cellswereculturedinvitroanddividedrandomlyintoacontrolgroupandahyperoxiagroup．Thehyperoxiagroupwasexposedtoamixtureofoxygen(O2，900mL／L)andcarbondioxide(CO2，50mL／L)f0r10min，thenculturedinaclosede

6、nvironment．Thechangesinmor·phologywereobservedunderinve~edmicroscopeafterexposuretooxygenorairfor24hours．Thecellapoptosiswasde—tectedbyflowcytometry(FC)after24hours．Andtheexpressionofp66Shcwasdetectedbyimmunohistochemicalmethodafter24hours．Thecorrelationofthechangesinmitochondria

7、lmembranepotentialandp66Shcproteinexpres—sionwasanalyzedbyusingBivariatecorrelationanalysis．Results1．Underinve~edmicroscopy，A549ceilsfromtheairgroupsignificantlyincreased，stucktoeachothertightlyandgrewveryquickly．Theiradhesionwasbetter，muhy—an—gleoblateandmanycellswereindivisionp

8、hase．Comparedwiththecontrolgroup，thechan