欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:55598334
大小:583.65 KB
页数:4页
时间:2020-05-20
《细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrinβ4水解的影响.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第40卷第1期贵阳医学院学报Vo1.40No.12015年1月JOURNALoFGUIYANGMEDICALCOLLEGE2015.1细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrinI34水解的影响冰严莉莎,霍建云,董宇华,潘娅,王晋星一,陈妮,臧贵勇。,胡晓霞,陈腾祥(1.贵阳医学院生理学教研室,贵州贵阳550004;2.贵阳医学院机能学实验室,贵州贵阳550004;3.贵阳医学院人体解剖学教研室,贵州贵阳550004)[摘要]目的:研究细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrin水解机制。方法:常规培养高密度和低密度MCF7乳腺癌
2、细胞,分别给予钙离子螯合剂和肝素处理,用Westernblot检测不同培养密度MCF7细胞integrinB4的水解情况;用Fluo.3AM作为钙离子荧光探针,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子的分布。结果:Westernblot检测结果显示,在低密度和高密度培养的MCF7细胞中,integrin134的水解模式不同;在高浓度培养的细胞中,200kDintegrin片段产生增多;激光共聚焦扫描显微镜观察发现,低密度培养MCF7细胞中,钙离子的绿色荧光主要成团或颗粒状分布,而且与红色荧光有较多的重合,部分钙离子分布于细胞核内;在高密度培养
3、的细胞中,钙离子在细胞质膜和细胞核中的定位较少;q5离子螯合剂BAPTA—AM处理可使200kDintegrin134明显减少;10~moL/L的肝素能够减少MCF7细胞200kD水解片段的增多,随着肝素浓度的增高,抑制效果有所增强;相对于BAPTA—AM,10moL/L肝素的抑制效应减弱。结论:高密度培养的MCF7细胞中,钙离子从钙库中释放,细胞外内流增多,激活calpain2,导致200kDintegrinB4水解片段增多。[关键词]钙离子;培养密度;整合素B4;钙激活中性蛋白酶2;肝素[中图分类号]R737.9;R73—37[文献标
4、识码]A[文章编号]1000.2707(2015)01-0006-04TheProteolysisofIntegrinp4inMCF7BreastCancerCellisAfectedbyCellDensityinCultureYANLisha,HEJianyun,DONGYuhua,PANYa。,WANGJingxingyi,CHENNi。,ZANGGuiyong,HUXiaoxia,CHENTengxiang(J.DepartmentofPhysiology,GuiyangMedialCollege,Guiyang550004,Gu&
5、hou,China;2.FunctionalLaboratoryGuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,Gu&hou,China;3.DepartmentofAnatomy,GngMedicalCollege,Guiyang550004,Guizhou,China)[Abstract]Objective:Toinvestigatetheroleandit§mechanismofcelldensityincultureonthepro—teolysisofintegrin134.Methods:MCF7was
6、culturedtoreach70%(sparse)and100%(dense)andthentreatedwithcalciumionchelatorandheparin.Westernblotwasutilizedtodetectedtheproteolysisofintegrin134.andFluo.3AMwasusedasfluorescenceprobeforcalciumiontoobserveitslocalizationinsidecel1.Results:AsWesternblotresultsshowing,thep
7、roteolysisprofileofintegrin134wasdifferentbetweencellsculturedassparseanddense.Indense.200kDintegrin134fragmentwasin.creased。whichcouldbeattenuatedbyBAPTA—AM(calciumionchelator)andheparin.However。theinhibitoreffectsofheparinwasdose—dependent,butreachedtoitsplatformas10~mo
8、t/L,whichwaslessthanBAm—AMevenifheparinreachedtol0~mot/L.Conclusions:InMCF7cellswithhigh[基金项目]国家
此文档下载收益归作者所有