细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrinβ4水解的影响.pdf

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1、第40卷第1期贵阳医学院学报Vo1．40No．12015年1月JOURNALoFGUIYANGMEDICALCOLLEGE2015．1细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrinI34水解的影响冰严莉莎，霍建云，董宇华，潘娅，王晋星一，陈妮，臧贵勇。，胡晓霞，陈腾祥(1．贵阳医学院生理学教研室，贵州贵阳550004；2．贵阳医学院机能学实验室，贵州贵阳550004；3．贵阳医学院人体解剖学教研室，贵州贵阳550004)[摘要]目的：研究细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrin水解机制。方法：常规培养高密度和低密度MCF7乳腺癌

2、细胞，分别给予钙离子螯合剂和肝素处理，用Westernblot检测不同培养密度MCF7细胞integrinB4的水解情况；用Fluo．3AM作为钙离子荧光探针，激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子的分布。结果：Westernblot检测结果显示，在低密度和高密度培养的MCF7细胞中，integrin134的水解模式不同；在高浓度培养的细胞中，200kDintegrin片段产生增多；激光共聚焦扫描显微镜观察发现，低密度培养MCF7细胞中，钙离子的绿色荧光主要成团或颗粒状分布，而且与红色荧光有较多的重合，部分钙离子分布于细胞核内；在高密度培养

3、的细胞中，钙离子在细胞质膜和细胞核中的定位较少；q5离子螯合剂BAPTA—AM处理可使200kDintegrin134明显减少；10～moL／L的肝素能够减少MCF7细胞200kD水解片段的增多，随着肝素浓度的增高，抑制效果有所增强；相对于BAPTA—AM，10moL／L肝素的抑制效应减弱。结论：高密度培养的MCF7细胞中，钙离子从钙库中释放，细胞外内流增多，激活calpain2，导致200kDintegrinB4水解片段增多。[关键词]钙离子；培养密度；整合素B4；钙激活中性蛋白酶2；肝素[中图分类号]R737．9；R73—37[文献标

4、识码]A[文章编号]1000．2707(2015)01-0006-04TheProteolysisofIntegrinp4inMCF7BreastCancerCellisAfectedbyCellDensityinCultureYANLisha，HEJianyun，DONGYuhua，PANYa。，WANGJingxingyi，CHENNi。，ZANGGuiyong，HUXiaoxia，CHENTengxiang(J．DepartmentofPhysiology，GuiyangMedialCollege，Guiyang550004，Gu&

5、hou，China；2．FunctionalLaboratoryGuiyangMedicalCollege，Guiyang550004，Gu&hou，China；3．DepartmentofAnatomy，GngMedicalCollege，Guiyang550004，Guizhou，China)[Abstract]Objective：Toinvestigatetheroleandit§mechanismofcelldensityincultureonthepro—teolysisofintegrin134．Methods：MCF7was

6、culturedtoreach70％(sparse)and100％(dense)andthentreatedwithcalciumionchelatorandheparin．Westernblotwasutilizedtodetectedtheproteolysisofintegrin134．andFluo．3AMwasusedasfluorescenceprobeforcalciumiontoobserveitslocalizationinsidecel1．Results：AsWesternblotresultsshowing，thep

7、roteolysisprofileofintegrin134wasdifferentbetweencellsculturedassparseanddense．Indense．200kDintegrin134fragmentwasin．creased。whichcouldbeattenuatedbyBAPTA—AM(calciumionchelator)andheparin．However。theinhibitoreffectsofheparinwasdose—dependent，butreachedtoitsplatformas10～mo

8、t／L，whichwaslessthanBAm—AMevenifheparinreachedtol0～mot／L．Conclusions：InMCF7cellswithhigh[基金项目]国家