Integrin β1 -Rac1对乳腺浸润性微乳头状癌细胞极性倒转的影响

《Integrin β1 -Rac1对乳腺浸润性微乳头状癌细胞极性倒转的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R737.9学校代码：10062密级：学号：2014601048博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：Integrinβ1-Rac1对乳腺浸润性微乳头状癌细胞极性倒转的影响TITLETheEffectofIntegrinβ1-Rac1onthePolarityReversalofBreastInvasiveMicropapillaryCarcinoma一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：刘冰冰导师：付丽教授天津医科大学研究生院二〇一七年十二月分类号：R737.9学校代码：10062密级

2、：学号：2014601048学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：Integrinβ1-Rac1对乳腺浸润性微乳头状癌细胞极性倒转的影响TITLETheEffectofIntegrinβ1-Rac1onthePolarityReversalofBreastInvasiveMicropapillaryCarcinoma一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：刘冰冰导师：付丽教授导师组成员：谷峰教授天津医科大学研究生院二〇一七年五月中文摘要目的浸润性微乳头状

3、癌（IMPC）是一种非常容易发生淋巴结转移且预后不佳的恶性肿瘤，它具有的独特的极性倒转的细胞集团性生长、浸润和转移方式，可能是其高侵袭、转移的关键因素，但对其机制还不甚清楚。我们前期结果证明，IMPC在组织学上呈现细胞集团性生长、浸润和转移。肿瘤细胞团外表面存在大量微绒毛并且和周围的间质连接疏松，细胞之间却为紧密连接。上皮性钙粘蛋白（E-cadherin，E-cad）的免疫组织化学实验显示在IMPC微乳头肿瘤细胞之间的连接面E-cad表达增加，但在微乳头面向间质侧的外表面E-cad表达却为阴性或减弱。有文献报道Integri

4、nβ1在腺腔的形成中起重要作用，并可维持上皮细胞的极性。Rac1被认为是integrin的调节开关，并在多种肌动蛋白依赖性活动中发挥了重要作用。而且Rac1与细胞粘附于细胞外基质并保持上皮的正常极性存在相关性。但是，关于Integrinβ1、Rac1在IMPC中的表达情况及调控关系，目前尚无报道。因此，本研究在细胞学水平研究Integrinβ1,Rac1的表达及对细胞极性的调控作用，并结合临床样本验证，探讨导致IMPC极性倒转和转移的机制。方法1)我们应用siRNA干扰的方法分别降低Integrinβ1和Rac1蛋白的表达，

5、并设计阴性对照siRNA-ctrl。我们用RealtimePCR和Westernblot方法分别检测了MCF-10A中应用siRNA-Integrinβ1和siRNA-Rac1转染后mRNA和蛋白水平的表达情况。2)为了进一步验证细胞极性的改变是否与Integrinβ1有关，我们对MCF-10A细胞系进行了凝胶包埋三维立体培养，然后通过siRNA下调Integrinβ1的表达。3)我们用罗丹明标记的羊抗兔IgG标记MUC-1为红色荧光，DAPI标记细胞核。siRNA-ctrl为阴性对照。应用免疫荧光方法验证干扰后细胞极性的变

6、化。4)为了进一步研究Integrinβ1对Rac1是否存在调控作用，我们应用Integrinβ1的抑制剂AIIB2分别处理乳腺癌细胞系和IMPC原代细胞。我们选用乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和IMPC、IDC-NOS原代肿瘤细胞进行凝胶包埋三维立体培养，并按7.5µg/ml浓度在培养基中加入AIIB2，不加AIIB2处理孔设为对照。AIIB2处理72h后，应用westernblot方法分别检测各组细I胞的Rac1蛋白表达情况。5)我们对IMPC原代肿瘤细胞进行凝胶包埋三维立体培养，然后应用AIIB2进行处理

7、，未处理组设为阴性对照。我们选用罗丹明标记的羊抗兔IgG标记MUC-1为红色荧光，FITC标记的羊抗小鼠IgG标记E-cadherin为绿色荧光，DAPI标记细胞核。免疫荧光方法验证干扰后细胞极性的变化。6)我们对102例乳腺IMPC以及100例浸润性导管癌-非特殊型（IDC-NOS）的组织标本进行了Integrinβ1和Rac1的免疫组化检测，并将两种蛋白的表达情况结合患者的临床病理学参数以及预后进行了分析。结果1)转染了siRNA-Integrinβ1后，MCF-10A细胞系Integrinβ1的mRNA表达较对照组显著

8、降低。转染了siRNA-Rac1后，MCF-10A细胞系Rac1的mRNA表达较对照组也显著降低。2)转染siRNA-Integrinβ1后，MCF-10AIntegrinβ1和Rac1蛋白表达均明显下调；而转染siRNA-Rac1的MCF-10A细胞系，仅有Rac1蛋白表达下调，Inte