苹果砧木山定子MbNas1的克隆、表达与亚细胞定位.pdf

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1、第54卷第9期湖北农业科学Vo1．54No．92015年5月HubeiAgriculturalSciencesMay．，2015苹果砧木山定子MbNasl的克隆、表达与亚细胞定位杨国慧，石岩，吕冰玉，王冰，于洋，韩德果(东北农业大学园艺学院／农业部东北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室．哈尔滨150030)摘要：以苹果砧木山定子(Malu~baccata)为试材，根据小金海棠(MalusiaojinensisChengetJiang)中克隆得到的尼克烟酰胺合成酶基因MxNasI(登录号：DQ403256)的全长序列设计特异引物．通过RT—PCR

2、方法从山定子cDNA中克隆到Nasl基因并命名为NasI，该基因全长为978bp。预测该基因可编码325个氨基酸。理论等电点为5．26，相对分子质量为36．O9ku。Real—timePCR结果表明．正常供铁(ED．TA—Naf’e，40p~mol／L)时，该基因在山定子水培苗的新叶、老叶、根、茎的韧皮部中均有表达。在木质部表达量较低；缺铁处理(4p．mol／L)时，该基因在根和新叶中的表达加强，第6天达到最高值，之后开始下降；在老叶中表达逐渐减弱；高铁处理(160I~molfL)时，该基因在根和新叶中的表达减弱．在第9天达到最小值。之后有所上升；

3、在老叶中表达逐渐增强。基因枪亚细胞定位试验表明，MbNas1蛋白质定位在细胞质膜上。关键词：山定子(Malusbaccata)；尼克烟酰胺合成酶基因(MbNas1)：表达分析：亚细胞定位中图分类号：Q7文献标识码：A文章编号：0439—8114(2015)09—2260—04DOI：IO．14088~．cnki．issn0439—8114．2015．09．058Cloning，ExpressionAnalysisandSubcellularLocalizationofNicotianamineSynthaseGene1(MbNas1)inApple

4、StockMalusdomesticaYANGGuo-hui，SHIYan，LVBing-yu，WANGBing，YUYang，HANDe-guo(CollegeofHorticulture，NortheastAculturalUniversity／KeyLaboratoryofBiologyandGeneticImprovementofHorticulturalCropsofNortheastRegion，Ministryofigriculture，Harbin150030，China)Abstract：TheapplestockMalusbac

5、catawasusedastestmaterials，thespecificprimersweredesignedaccordingtosequenceofMalusxiaojinensisChengetJiangnicotianaminesynthasegeneMxNas1(accessionnumber：DQ403256)．NaslgenewasclonedfromcDNAofMalusbaccatabyRT—PCRmethodandnamedasMbNas1．SequenceanalysisshowedthattheMbNaslgenecon

6、tainsacompletesequenceof978bp，thepredictedproteinofMbNaslcomprises325aminoacidswithatheoreticalisoelectricpointof5．26andapredictedmolecularweightof36．09kD．Real-timeRT—PCRwasoperatedforinvestigatingtheexpressionsleveloftheMdNas1invariousMalusbaccatatissues．InnormalFelevel(EDTA—

7、NaFe，40~tmol／L)，MdNas1wasexpressedpreferentiallyinnewleaf，oldleaf，root，andalsointhephloemofstemofMalusbaccataseedlings，however，theexpressioninthexylemwasverylow．TheexpressionlevelsofMdNa~1increasedinrootandnewleaf，reachedthemaxi—mumsat6d，thendecreasedslightlywhendealtwithlowFe

8、stress(4~mol／L)，theexpressionlevelofMdNasIinmatureleafdecreas