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时间:2020-05-18
《微小RNA-19a对肝细胞LO2脂肪分解代谢的影响.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2015,31(3):481_484·481·[文章编号]1000—4718(2015)03—0481—04微小RNA.19a对肝细胞LO2脂肪分解代谢的影响田晓玲,林凤平,李伟民,刘秀芬(咸宁市中心医院内分泌科,湖北科技学院临床学院,药学院,湖北咸宁437100)[摘要]目的:观察微小RNA一19a(microRNA一19a,miR-19a)对肝细胞L02脂肪分解代谢的影响,并初步探索可能机制。方法:在肝细胞L02中转染miR一19a模拟物(mimics)或miR
2、一19a抑制物(inhibitor),用实时荧光定量PCR检测miR.19a的水平变化,利用生物信息学网站查找miR-19a的靶点,进而用双萤光素酶报告基因实验验证miR.19a对过氧化物酶体增殖物激活受体OL(peroxisomeproliferator—activatedreceptor0【,PPARc~)3’UTR活性的影响,通过Westernblotting法检测PPARct及其下游脂肪分解代谢关键限速酶酰基辅酶A脱氢酶(acyl—coenzymeadehy-drogenase,ACADM)和肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(carnitin
3、epalmit0yltransferase1A,CPT1A)蛋白水平的变化,通过B一羟丁酸(beta—hydroxybutyricacid,B—OHB)试剂盒检测肝细胞L02内酮体的生成能力。结果:转染miR一19amimics可显著升高L02细胞中的miR一19a水平(P<0.05),而转染miR一19ainhibitor可明显抑制L02细胞中的miR一19a水平(P<0.05);生物信息学分析提示PPARa可能为miR一19a的潜在靶点,双萤光素酶报告基因实验证实了miR一19amimics可使PPARoL的3’UTR活性明显降低,miR
4、一19ainhibitor可使PPARct的3’UTR活性显著升高,同时伴随PPARc~及其下游基因ACADM和CPT1A的蛋白水平变化。此外,miR.19amimics明显降低肝细胞LO2中13-OHB的含量(P<0.05),miR.19ainhibitor可明显上调肝细胞LO2中3-OHB的含量(P<0.05)。结论:miR一19a可通过调控PPARc~及其下游关键限速酶的表达,调节肝细胞的脂肪分解代谢能力。[关键词]微小RNA-19a;过氧化物酶体增殖物激活受体;脂肪分解代谢[中图分类号]R363[文献标志码]Adoi:10.3969/
5、j.issn.1000—4718.2015.03.017EfectofmiR一19aonlipidcatabolisminhepatocyteLO2TIANXiao—ling,UNFeng—ping,LIWei—min,UUXiu—fen(DepartmentofEndocrinology,XianningCentralHospital,DepartmentofInternalMedicine;DepartmentofPharmacolo—gY,HubeiUniversityofScienceandTechnology,Xianning437
6、100,China.E—mail:lin3126@126.eom)[ABSTRACT]AIM:ToobservetheeffectofmicroRNA一19a(miR一19a)onthelipidcatabolismofhepatocyteL02,andtoexplorethepotentialmechanism.METHODS:miR-19awasover—expressedorsilencedbytransfectionofmiR一19amimicsormiR一19ainhibitorintoL02cells.thenthemRNAlev
7、elofmiR一19awasdetectedbyreal—timePCR.ThepotentialtargetofmiR一19awasfoundbythemethodofbioinformaticsthroughinternetwebsite.TheefectofmiR一19aonthe3’UTRofperoxisomeproliferator-activatedreceptorot(PPARet)wasmeasuredbydualluciferasereporterassay,andtheproteinlevelofPPARctandits
8、2majordownstreamrate—limitingenzymesinvolvedinlipidcatabolism,acyl-coenzymeadehydr
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