微小RNA-19a对肝细胞LO2脂肪分解代谢的影响.pdf

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1、中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2015，31(3)：481_484·481·[文章编号]1000—4718(2015)03—0481—04微小RNA．19a对肝细胞LO2脂肪分解代谢的影响田晓玲，林凤平，李伟民，刘秀芬(咸宁市中心医院内分泌科，湖北科技学院临床学院，药学院，湖北咸宁437100)[摘要]目的：观察微小RNA一19a(microRNA一19a，miR-19a)对肝细胞L02脂肪分解代谢的影响，并初步探索可能机制。方法：在肝细胞L02中转染miR一19a模拟物(mimics)或miR

2、一19a抑制物(inhibitor)，用实时荧光定量PCR检测miR．19a的水平变化，利用生物信息学网站查找miR-19a的靶点，进而用双萤光素酶报告基因实验验证miR．19a对过氧化物酶体增殖物激活受体OL(peroxisomeproliferator—activatedreceptor0【，PPARc~)3’UTR活性的影响，通过Westernblotting法检测PPARct及其下游脂肪分解代谢关键限速酶酰基辅酶A脱氢酶(acyl—coenzymeadehy-drogenase，ACADM)和肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(carnitin

3、epalmit0yltransferase1A，CPT1A)蛋白水平的变化，通过B一羟丁酸(beta—hydroxybutyricacid，B—OHB)试剂盒检测肝细胞L02内酮体的生成能力。结果：转染miR一19amimics可显著升高L02细胞中的miR一19a水平(P<0．05)，而转染miR一19ainhibitor可明显抑制L02细胞中的miR一19a水平(P<0．05)；生物信息学分析提示PPARa可能为miR一19a的潜在靶点，双萤光素酶报告基因实验证实了miR一19amimics可使PPARoL的3’UTR活性明显降低，miR

4、一19ainhibitor可使PPARct的3’UTR活性显著升高，同时伴随PPARc~及其下游基因ACADM和CPT1A的蛋白水平变化。此外，miR．19amimics明显降低肝细胞LO2中13-OHB的含量(P<0．05)，miR．19ainhibitor可明显上调肝细胞LO2中3-OHB的含量(P<0．05)。结论：miR一19a可通过调控PPARc~及其下游关键限速酶的表达，调节肝细胞的脂肪分解代谢能力。[关键词]微小RNA-19a；过氧化物酶体增殖物激活受体；脂肪分解代谢[中图分类号]R363[文献标志码]Adoi：10．3969／

5、j．issn．1000—4718．2015．03．017EfectofmiR一19aonlipidcatabolisminhepatocyteLO2TIANXiao—ling，UNFeng—ping，LIWei—min，UUXiu—fen(DepartmentofEndocrinology，XianningCentralHospital，DepartmentofInternalMedicine；DepartmentofPharmacolo—gY，HubeiUniversityofScienceandTechnology，Xianning437

6、100，China．E—mail：lin3126@126．eom)[ABSTRACT]AIM：ToobservetheeffectofmicroRNA一19a(miR一19a)onthelipidcatabolismofhepatocyteL02，andtoexplorethepotentialmechanism．METHODS：miR-19awasover—expressedorsilencedbytransfectionofmiR一19amimicsormiR一19ainhibitorintoL02cells．thenthemRNAlev

7、elofmiR一19awasdetectedbyreal—timePCR．ThepotentialtargetofmiR一19awasfoundbythemethodofbioinformaticsthroughinternetwebsite．TheefectofmiR一19aonthe3’UTRofperoxisomeproliferator-activatedreceptorot(PPARet)wasmeasuredbydualluciferasereporterassay，andtheproteinlevelofPPARctandits

8、2majordownstreamrate—limitingenzymesinvolvedinlipidcatabolism，acyl-coenzymeadehydr