棉花纤维素生物合成相关蛋白的抗体制备.pdf

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1、棉花学报CoRonScience2012，24(2)：106-113棉花纤维素生物合成相关蛋白的抗体制备范建’，刘绪，范春芬，黄江锋，罗兵，彭良才，夏涛(1．华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室／生物质与生物能源研究中心／植物科学技术学院／生命科学技术学院武汉430070；2．常熟理S-学院，江苏常熟215500)摘要：棉花纤维细胞生长过程中，有多种蛋白质参与纤维素的合成，为了深入研究这些蛋白质的功能，制备它们的抗体具有重要意义。本研究分别用化学合成多肽和原核表达蛋白制备的可溶性蛋白、可复性包涵体以及包涵体颗粒作为抗原，制备了棉花纤维素合酶CESA1、CESA2和SUS

2、Y1、p—l，4-glucanase、p-1，3一glucanase和Callosesynthase的抗体。结果表明，化学合成多肽和原核表达蛋白均可用于抗体制各，制得的抗体可用于棉花纤维素合成相关蛋白的检测。关键词：棉花；纤维素合酶；抗体中图分类号：$562．035．3文献标志码：A文章编号：1002—7807(2012)02—0106-08AntibodyPreparationofProteinslnvolvedinCelluloseBiosynthesisinCottonFibersFANJian，LrUXu，FANChun—fen，HUANGJiang-feng，L

3、UOBing，PENGLiang-cai，XIATao(1．NationalKeyLaboratoryofCropGeneticImprovementandNationalCentreofPlantGeneResearch／BiomassandBioener-gYResearchCentreCollegeofPlantScienceandTechnologyfCollegeofLifeScienceandTechnology,HuazhongAgricultur-alUniversity,Wuhan430070，China；2．CollegeofBiologyandFoo

4、dEngineering,ChangshuInstituteofTechnology,Changshu215500，China)Abstract：Co~onfibersaresingle—celledseedsalmostentirelyconstructedofcellulose，thusservingasmodelplantsforcellulosesynthesis．PreviousresearchhasreportedthatCESA1，CESA2，CESA3，SUSY1，p-1，4一glucanase，p-1，3-glucanase，callosesyn—tha

5、seandotherproteinshaveveryimportantfunctionsduringcellulosesynthesis．Inordertovalidatethemechanismsbywhichtheseproteinsact，antibodypreparationisnecessary．HerewepreparedtheCESA2andCESA3antigensbychemicalsynthesis，andtheotherantigensbyprokaryoticexpression．TheCESA1antigenisasoluterecombinan

6、tprotein；theSUSY1antigenisarecombinantandrefoldedinclusionbody；3-1，4-glucanase，B一1，3-glucanase，andcallosesynthaseantigensarefoldinclusionbodies．AlltheantibodiesweredetectedbyWesternblotting，andtheresultssuggestthatalltheantibodies，withtheexceptionofCESA3．canbeusedtocheckthetargetprotein．T

7、hisstudyfindsthattheinclusionbodiescanbedirectlyusedastheantigenforantibodypreparation．Keywords：coaon；cellulosesynthase；antibody植物纤维素是由原生质膜上纤维素合酶复UDP．G是纤维素合成的底物，SUSY的主要功能合体合成的，复合体以多种纤维素合酶(Cellulose是将蔗糖转化成UDP—G，用于纤维素合成}2_。B．1，synthase，CES)为核心，结合其它各种纤维素合成4一葡聚糖酶(B．1，4-