昆虫病原细菌Cip蛋白多克隆抗体的制备.pdf

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1、河南农业科学，2013，42(8)：62—66JournalofHenanAgriculturalSciences昆虫病原细菌Cip蛋白多克隆抗体的制备游娟，黄建林。，曹莉。，韩日畴。(1．广东药学院生物化学与分子生物学系，广东广州510006；2．广州计量检测技术研究院，广东广州510030；3．广东省昆虫研究所，广东广州510260)摘要：昆虫病原发光杆菌属(Photorhabdus)细菌产生2种胞内晶体蛋白CipA和CipB，为其共生线虫的生长发育提供营养。基于Cip蛋白已在大肠杆菌原核表达系统中得到稳定且高水平表达，以纯化的重组Cip蛋白为抗原，免疫新西兰大耳兔制备多克隆抗

2、体，ELISA测定2种蛋白抗血清效价，均可达到1：6400。Westernblot分析显示，制备的抗体均可特异识别发光杆茵的胞内晶体蛋白。Cip蛋白多克隆抗体的制备为建立该类蛋白的免疫学检测方法奠定了基础。关键词：昆虫病原细茵；发光杆菌属；胞内晶体蛋白；多克隆抗体；制备中图分类号：$476．1l文献标志码：A文章编号：1004—3268(2013)08—0062一O5PreparationofPolyclonalAntibodyagainstCrystallineInclusionProteinofEntomopathogenicBacteriumY0UJuan，HUANGJian

3、-lin，CAOLi。，HANRi—chou。(1．DepartmentofBiochemistry&MolecularBiology，GuangdongPharmaceuticalUniversity。Guangzhou510006，China2．GuangzhouInstituteofMetrology&TestingTechnology，Guangzhou510030，China；3．GuangdongEntomologicalInstitute，Guangzhou510260，China)Abstract：EntomopathogenicPhotorhabdusbacter

4、iaproducetwotypesofintracellularcrystallineinclusionproteins，CipAandCipB，asthenutrientresourceforthesymbioticnematode．Basedonconstructedhigh—levelprokaryoticexpressionsystem，recombinantCipproteinswerepurifiedwithawarmextractmethodandusedastheantigenstoimmuneNewZealandrabbits，respectively．Thepo

5、lyclonalantibodieswiththetitersof1：6400wereraisedandmonitoredbyindirectan—zyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)．WesternblotassayconfirmedthattheantibodiescouldspecificallyrecognizetheinclusionproteinsinPhotorhabdusbacteria．PreparationofCippolyclonalantibodieswillbehelpfultOdeveloptheimmunologic

6、alassaymethodoftheseproteins．Keywords：entomopathogenicbacterium；Photorhabdus；crystallineinclusionprotein；polyclonalantibody；preparation昆虫病原线虫是一类在世界范围被广泛认可的晶体蛋白[4-s]。该类蛋白富含疏水氨基酸，且其氨基高效安全的生物农药[1]。昆虫病原发光杆菌属酸含量和组成与共生线虫的营养需求一致。在富含(Photorhabdus)细菌定殖于异小杆线虫属(Hete-Cip蛋白的环境中，线虫的死亡率较低，大多能完成rorhabditis)线虫

7、肠道，与线虫互惠共生。细菌产生世代发育并得到具有高侵染力的感染期线虫(infec—丰富的代谢产物，实现对昆虫的毒性，并为线虫的生tivejuvenile，IJ)[g-73，而感染期线虫的得率是衡量这长繁殖提供营养[3]。Cip蛋白(crystallineinclusion种生物农药产品质量的指标之一。因此，对Cip蛋proteins)，包括CipA和CipB，分子量分别为11．6白的研究，有助于阐明“线虫一细菌”的共生机制，并kD、11．3kD，是P^0￡Dr口6ds