牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株gG基因的PCR扩增.pdf

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1、畜牧与饲料科学AnimalHusbandryandFeedScience2011，32(6)：8—10牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株gG基因的PCR扩增刘威，云涛。(1．内蒙古农牧业科学院，内蒙古呼和浩特010031；2．内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特010018)摘要：参考牛传染性鼻气管炎病毒全基因序列(GenBank)设计1对特异性引物，以牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株提取的总DNA为模板，运用PCR方法成功地扩增出牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株gG基因，并用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。关键词：牛传染性鼻气管炎病毒；gG基因；PCR扩增中图分类号：$852．65文献标识码：A

2、文章顺序编号：1672-5190(2011)06-0008—03PCRAmplificationofgGGeneofInfectiousBovineRhinotracheitisVirusIsolatedfromInnerMongoliaLIUWei．YUNTao(1．InnerMongoliaAcademyofAgriculturalandAnimalHusbandrySciences，Hohhot010031，China；2．InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010018，China)Abstract：Onepairofspecif

3、icprimersweredesignedbasedonthecompletegenomesequenceofinfectiousbovinerhinotracheitisvirus．TakingtotalDNAextractedfrominfectiousbovinerhinotracheitisvirusisolatedfromInnerMongoliaastemplate，gGgeneoftheinfectiousbovinerhinotracheitisvirusisolatedfromInnerMongoliawassuccessfullyamplifiedbyusingPC

4、Rmethod．Andtheamplificationproductsweredetectedbyagarosegelelectrophoresis．Keywords：bovinerhinotracheitisvirus；gGgene；PCRamplification牛传染性鼻气管炎(infectiousbovinerhinotracheitis，公司。IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(infectiousbovine1．1．4琼脂糖凝胶电泳所用溶液：低熔点琼脂糖购自rhinotracheitisvirus，IBRV)引起家养及野生牛发生的一种急Promega公司。溴化乙锭(EB)购自

5、天津联星公司。DL2000性、热性、接触性传染病，以高热、呼吸困难、鼻炎、窦炎和上DNAMarker，50xTAE缓冲液购自宝生物工程(大连)有限公呼吸道炎症为特征。还可引起母牛生殖系统损害、出现流产司。和死胎．以及发生肠炎和小牛脑炎．有时发生眼结膜炎和角10mg／mLEB贮存液：以10mg／mL浓度将EB溶于去离膜炎。20世纪50年代初，该病最先见于美国的育肥牛群，子水中，剧烈搅拌，完全溶解后，室温下闭光保1字。其主要表现为呼吸道症状，后经研究确定为IBR。1956年，1％琼脂糖凝胶：称取0．5g琼脂糖溶于50mL1xTAE电Madin等首次从病牛中分离出病毒。1964年，Huck确

6、认牛泳缓冲液，熔化后加人2-3L10mg／mLEB贮存液，使凝胶IBRV属于疱疹病毒。目前该病在世界范围内流行，对奶牛中EB终浓度达到O．5Ixg／mL。的产奶量、公牛的繁殖力及使役牛的使役力均有较大的影1．1．5主要仪器设备：超净工作台(frornascientific：)、DK一8D响．而且急性的IBR呼吸道感染可继发牛致命性细菌性肺型电热恒温水浴锅、TGL一16型高速离心机、PTC一100TM炎．是造成养牛业经济损失的主要原因之一l】。PCR扩增仪、紫外凝胶成像分析系统、DYY—III稳压稳流电该试验应用PCR技术对IBRV内蒙古分离株基因泳仪、SK一1涡旋快速混匀器、Mettl

7、erAE240型电子天平等进行了扩增，为今后进一步研究IBRV内蒙古分离株基均由内蒙古自治区动物疫病预防控制中心提供。因的生物学特征提供物质基础。1．2方法1材料与方法1．2．1引物的设计与合成：根据GenBank提供的IBRV全基1．1材料因序列(NC_001847)，利用DNAStar5．O1软件设‘1对用1．1．1病毒：内蒙古分离株病毒IBRV—NMO6，为牛睾丸细于扩增基因的特异性引物，基因预扩增片段大小为胞培养物，由内蒙古农业大学家畜