马腺苷酸脱氨酶1在马胎儿皮肤细胞中促进马传染性贫血病毒LTR的启动活性.pdf

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1、第36卷第1期中国预防兽医学报VO1．36．No．12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．01．03马腺苷酸脱氨酶1在马胎儿皮肤细胞中促进马传染性贫血病毒LTR的启动活性付丽华，汤艳东，那雷，王雪峰，林跃智，杜承，周建华，曲娟娟(1．东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物病研究室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：腺苷酸脱氨酶(

2、AOAR)1可催化双链RNA的腺嘌呤核苷酸(A))lifi氨转化为次黄嘌呤核苷酸(I1，该基因参与了很多病毒的复制与进化。在前期研究中对马传染性贫血病毒(EIAv)疫苗株基因组在体外培养细胞传代致弱过程中的变异规律进行了分析，表明与致弱前强毒株相比，EIAV弱毒疫苗株基因组出现高频率的A—I超突变，推测主要由腺苷酸脱氨酶1(ADAR1)催化导致，使基因组突变累积后的EIAV体内复制能力降低而弱化。为初步研究ADAR1在EIAV致弱中的作用，本研究应用PcR技术首次克隆了马ADAR1(eADAR1)的cDNA。经确认该重组蛋白在293T细胞中的正确表达

3、后，将表达eADAR1的质粒与EIAV长末端重复区rLTR)控制的报告基因质粒共同转染马胎皮肤(FED)细胞，检测eADAR1对LTR启动活性的影响。实验数据表明，该ADAR1可以在体外培养的EIAV靶细胞中显著促进LTR启动的荧光素酶表达，显示eADAR1可以通过调控LTR促进EIAV的复制。以上结果提示eADAR1可以明显影响EIAV复制，但其机制较复杂，尚待深入研究。关键词：马腺苷酸脱氨酶1；马传染性贫血病毒；长末端重复区中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)01．0011-04Over—express

4、ionofequineADAR1enhancestheactivityofequineinfectiousanemiavirusLTRinFEDcellsFULi-hua，TANGYan—dongz，NALei2,WANGXue—feng~，LINYue—zhi，DUCheng2，ZHOUJian—hua2，QuJuanquan(1．CollegeofLifeScience，NortheastAgriculturalUniversity，Ha~in150030，China；2．StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotech

5、nologyHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Toinvestigatetheequineinfectiouanemiavirus(EIAV)aRenuatedmechanism，wecomparedthegenomesofvirulentstrainsandvaccines，andtheresultshowedthathighfrequencyofAtoGhypermutationwas

6、identifiedinviralgenomesofEIAVduringtheaRenumingprocess．Baseonthepublishedresuhsofothers，itispresumedthattheadenosinedeaminasesthatActonRNA1(ADAR1)playedanimportantroleintheAtoGhypermutation．AndwespeculatedtheaccumulatedAtoGmutationmightreducetheEIAVreplicationabilitywhichaRenu

7、atedthevirus．Inthisstudy，toexploretheroleofADAR1，theequineADAR1cDNAwasclonedandover．expressedincultivatedequinefetalderma1(FED)cells．TheresultsshowedthattherecombinantADAR1significantlyenhancedtheluciferaseactivityinareporterplasmidthatpromotedbyEIAVLTR，suggestingtheenhancivepo

8、tencyratherthaninhibitionofequineADAR1onEIAVreplicatio