抗马传染性贫血病毒Rev蛋白单克隆抗体的制备.pdf

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1、第36卷第2期中国预防兽医学报Vo1．36，No．22014年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb．2014doi：10．3969／j．issn．1008—0589．2014．02．17抗马传染性贫血病毒Rev蛋白单克隆抗体的制备郭纪珂，戈曼，一，张泽力，．，马建，申之义1，王晓钧z(1．内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特010010；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物病研究室，黑龙江哈尔滨150001；3．东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；4．东

2、北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨150040)摘要：为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb)，本研究以原核表达并纯化的重组EIAVRev为免疫原，免疫BALB／c小鼠，将其脾细胞与SP2／O细胞融合，采用间接ELISA方法筛选阳性克隆，经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定分泌抗Rev的杂交瘤细胞株。MAb亚型鉴定为IgG2a／K。Westernblot与间接免疫荧光试验结果显示，获得的MAb与真核表达的Rev呈阳性反应。本研究首次制备了抗EIAVRev的MAb，为Rev的功能研究奠定了基础。关键词：马传染性贫血病毒；R

3、ev；单克隆抗体中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)02．0157．03PreparationofmonoclonalantibodiesagainstRevproteinofequineinfectiousanemiavirusGUOJi-ke，GEMan2，ZHANGZe-li，MAJian，SHENZhi-yi，WANGXiao-jun(1．CollegeofVeterinaryMedicine，InnerMonogoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010010，China；2．Di

4、visionofLivestockInfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciencesHarbin150001，China；3．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030China；，4．CollegeofWildlifeResource，Northea

5、stForestryUniversity，Harbin150040，China)Abstract：Topreparethemonoclonalantibody(MAb)againstregulatorofexpressionofviralprotein(Rev)ofequineinfectiousanemiavims(EtAV)，theSP2／0cellswerefusedwiththespleniccellsfrommiceimmunizedwithprokaryoticallyexpressedandpurifiedrecombinantRevofEIAV．T

6、hehybridomacellswereselectedbyindirectELISAandpurifiedbylimiteddilutionmethod．Onehybridomacelllinesteadilysecretinganti-RevMAbwasobtainedwhichthesubtypewasIgG2a／K．ThewestemblotandindirectimmunofluorescenceassayindicatedthattheMAbwasabletoreactpositivelywiththenativeRevexpressedfromEIA

7、V．ThepreparationofMAbagainstRevofEIAVprovidedanusefultoolforthefurtherstudyofRevfunctioninvirusreplication．Keywords：quineinfectiousanemiavirus；Rev；monoclonalantibody*Correspondingauthor收稿日期：2013．06．24基金项目：国家自然科学基金(31072113、31222054)；兽医生物技术国家重点实验室自主课题rsKLvBP2012、SKLVBP201304)；中央级公益性基本科

8、研业务费预