禽传染性喉气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备.pdf

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1、第34卷第3期中国预防兽医学报Vo1．34．NO．32012年3月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineM『dr．2叭2doi：10．3969~．issn．1008-0589．2012．03．16禽传染性喉气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备胡顺磊，赵妍，崔红玉，石星明，王玫，张晶，薛美，张晓敏，闰帅，孔聪聪，李巧玲，牛秀杰，王云峰(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001；2．云南农业大学，云南昆明650201)摘要：为制备抗鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)~

2、蛋白gD的单克隆抗体(MAb)，本研究通过原核表达gD重组蛋白，纯化后免疫6周龄雌性BALB／c小鼠，经细胞融合筛选获得一株稳定分泌抗ILTVgD蛋白的杂交瘤细胞株，MAb亚型经鉴定为IgG1，轻链为K链。Westernblot结果显示，这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够识别ILTV。ILTVgD蛋白的MAb的制备，为ILTV检测方法的建立奠定了基础。关键词：传染性喉气管炎病毒；gD蛋白；原核表达；单克隆抗体中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2012)03—0232—03Preparationofmonoclonalantibodiesa

3、gainstinfectiouslaryngotracheitisvirusgDproteinHUShun—lei，ZHAOYan，CUIHong—yu，SHIXing—ming，WANGMei，ZHANGJing，XUEMei，ZHANGXiao-min，YANShuai，KONGCong—cong，LIQiao—ling，NIUXiu-jie，WANGYun·feng(1．DivisionofAvianInfectiousDisease，StateKeyLaboratoryofVetefina~Biotechnology，HarbinVeterinaryResear

4、chInstitute，ChineseAcademyofAgricultureSciences，Harbin150001，China；2．YunnanAgricultureUniversity，Kunming650201，China)Abstract：Topreparemonoclonalantibody(MAb)againstglycoproteinDofinfectiouslaryngotracheitisvirus(ILTV)，theSP2／0cellswerefusedwithspleencellsofBALB／cmiceimmunizedwiththepuri

5、fiedrecombinantgDprotein，ahybridomacelllinestablysecretingantibodywasobtainedbyscanningwithindirectELISAcoatingwithpurifiedILTVascoatingantigen．TheMAbwasidentifiedtobeIgG1subclasswithKlightchain．WesternblotanalysisshowedthatMAbreactedpositivelywithILTV．TheMAbdevelopedcouldserveasatoolfor

6、furtherstudyonILTVanddevelopmentofdetectionmethodforILTVinfection．Keywords：infectiouslaryngotracheitisvirus；gDprotein；prokaryoticexpression；monoclonalantibody鸡传染性喉气管炎(Infectiouslaryngotracheitis，介导的免疫应答[2]，gD是病毒主要糖蛋白，也是病ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡的一毒主要抗原之一，并能够诱导机体产生特异性免疫种急性上呼吸道传染病，呈世界性分布，对

7、养禽业应答f3]。对其他疱疹病毒的研究显示，gD对病毒的造成严重危害⋯。吸附、穿入以及复制是必需的[4]。ILTV表面糖蛋白能够刺激机体产生体液和细胞本实验以原核表达的gD重组蛋白免疫BALB／c*Correspondingauthor收稿日期：2011—12．15基金项目：兽医生物技术国家重点实验室基本科研业务费(SKLVBP201022)；中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(ZGKJ201003)；黑龙江省杰出青年科学基金项目(JC200812)作者简介：胡顺磊(1985一)，男，山东临沂人，硕士研究生，主要从事禽传染性喉气管炎病