池州市鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定及gD基因序列分析.pdf

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3、鄭．．独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成ｉ果。尽我所知，除了文中特别加ｙｉ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：聋余裕时间：２０１６年５月巧曰关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许

4、论文被査阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。做密的学位论文在《憐后应进守此博议）研究生签名：寺矣徐时斬２０１６年５月巧日Ｖ一第导师签名：时间：兴年ｙ月ッ曰Ｉ／｜Ｉ摘要鸡传染性喉气管炎（虹ｆｅｃｔｉｏｕｓＬａｒｙｎｇｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ，圧Ｔ）是由鸡传染性喉气管炎病毒（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＬａｒｙｎｇｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓＶｉｍｓＩＬＴＶ）弓胞的酒病毒性呼吸道疾病，可引起鸡，

5、死亡或产蛋下降而造成严重的经济损失。２０１５年安徽省池州某鸡场１２０日龄蛋鸡发生疑似鸡传染性喉气管炎，该场存栏５０００只，临床症状为呼吸困难，发病率为６０％，死亡率为６０％，为了对该场发病情况进行确诊，本研究采集病鸡喉头气管组织及其分、３．２ＭＰＢＳ充分研磨泌物倍体积无菌０，反复冻融Ｈ次后屯取上清加入，剪碎加入离°‘－－Ｕ／ｍＬＣ解青链霉素５００）４，置于８０Ｃ冰。提取病鸡喉头气管及其分（育过夜箱备用一泌物总ＤＮＡ并根据ＧｅｎＢａｎｋ发表的鸡传染性喉气管炎病毒ｇＤ基因设计合成对特异性引物，从发病鸡喉头及其分泌物

6、中扩增出ｌＢ４ｂｐ大小片段；制备的组织液上清经鸡胚绒毛尿囊膜（ｃｈｏｒｉｏａｌｌａｎｔｏｉｃｍｅｍｂｒａｎｅ，ＣＡＭ）途径接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚，１２０ｈ后打开鸡胚，发现在鸡胚ＣＡＭ上发现典型痘斑，收集病变鸡胚痘斑和尿囊液，充分、研磨，反复冻融并离屯取上清按照相同途径连续接种鸡巧Ｈ次，取第４代鸡胚分离毒°－作为种毒，，保存于８０Ｃ毒通过滴鼻、点眼的方式接种５日龄健康麻羽肉鸡；将种２每只１０ＥＩＤｓｏ作为试验组，并使用同等剂量的无菌ＰＢＳ设置阴性对照，连续观察，结果发现？：攻毒３ｄ后试验组出现采食量下降，呼吸困

7、难，眼结膜坏死等症状，第４５ｄ症状加重并出现两只维鸡死亡，第９ｄ开始预后；而同时对照组无任何症状；剖检病死鸡发现其喉头气管出血，盲肠扁桃体肿大，并可从病死鸡喉头气管及其分泌物中检一株鸡传染性喉气管炎病毒￣［测到病毒。结果证实分离到，命名为ＣＺＬＴＶ１６株。Ｗ第４代鸡巧分离毒为材料提取病毒ＤＮＡ，并扩增ｇＤ基因，胶回收纯化后克隆至－Ｔ载体ｐＭＤｌＳ，转化入ＤＨ５ａ感受态细胞，挑取单克隆鉴定正确后进行测序，结果发现与ＧｅｎＢａｎｋ上已发表班基因序列同源性在９９％Ｗ上，基因进化树分析结果发现，分离毒处于独立分支，且

8、与Ｓｅｒｖａ株的亲缘性较近；：Ｄ基因关键词鸡传染性喉气管炎病毒；池州分离株；分离鉴定；ｇＡｂｓｔｒａｃｔＣｈｉｃｋｅ打ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＬａｒｙ打ｇｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ（Ｉｎｆｅｃｔｉ