tat蛋白对马传染性贫血病毒长末端重复序列启动子活性影响

《tat蛋白对马传染性贫血病毒长末端重复序列启动子活性影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要马传染性贫血病毒(equineinfectiousanemiavirus，ElAV)属于反转录病毒科慢病毒属．是马传染性贫血(equineinfectiousanem氓EIA，简称马传贫)的病原体。我国的马传贫驴白细胞弱毒疫苗，是迄今为止世界上唯一投入应用的慢病毒疫苗，应用该疫苗成功地控制了我国马传贫的流行，同时该疫苗也是研究慢病毒免疫预防非常有价值的模型。反转录病毒前病毒基因组长末端重复序列(LTR)对病毒复制有重要的调控作用，影响到病毒的复制动力学、细胞嗜性、致病力等方面。马传染性贫衄病毒弱毒疫苗株在培育过程中LTR发生了两处稳定突变，分别是T址反式激活区域

2、(T乱activatingregion，TAR)的起始碱基G到A和poIy(A)附加位点c到A的突变。本研究将EIAv强毒力毒株、白细胞弱毒(EIAv_DLA)、驴胎皮肤细胞弱毒(EIAv-FDD)的LTR，以及TAR起始碱基、poly(A)附加位点突变的L1’R分别克隆到pcAT3_basic质粒中，获得位于报告基冈氯霉素乙酰转移酶(cAT)上游的不同LTR重组质粒。同时将马传贫病毒反式激活蛋白1砒克隆丁真核表达载体pcDNA3．1(+)，获得了1缸蛋白的表达。将1甜表达质粒分别与不同LTR克隆共转染驴胎皮肤细胞，考察1n对LTR启动子活性的增强作用。研究发现，在

3、皮肤细胞中T缸蛋白可以特异性增强来源于皮肤细胞弱毒疫苗LTR的启动子活性，而对白细胞源性LTR无明显增强作用。TAR起始位点和poIy(A)的单碱基突变和联合突变对1饥的反式激活作用并无明显影响．提示TAR茎环结构的起始位点单碱基突变不能影响与11at相互作用。关键词：马传染性贫血病毒、长末端重复序列、T缸蛋白本研究得到国家“十五”“863”计划(项目编号200lAA223041)和国家自然科学基金项目(30170706)的资助AbstractEquineinfectious柚emiaVjms(EIAv)，aIentiViruswitlljnt11e肋mV一胁P鼬1

4、ily，isthccausatiVeagentofequineinfectiousanemia(EIA)．TheChinesedonkeyleukoc”eattenuatedstrainofEIAV(EIAV-DLA)wastheonlysuccessfullentjvimsVaccjneuptonow，whichhasbeen印pliedextensivelyjnChinaagainstElA．ElA_讥DLAcanserveasamodeIforstudyon1ennVirusv2Bcines．TheEIAVproviralgenomiclon分terminal

5、repeat(IJTR)isaeukaryoticpromot0LwhichplaysanimportantregulatoryroleontranscriptionandreplicationoftlleviⅢsTherearetwOsitesmutationsoccuredintheURoftheChineseEIAv舭nuatedVaccineduringitsattenuationpmcess矗omawidelypesn丑in．011eloc8tedatthebeginningofTAR，whichchangedfmmAtoG；a110theristllea

6、ppendingsiteofpoly(A)whichchangedfromCAtoAA．Here，weuseaCATreportgenetoeValuatet11epromoteractivetyofU1Rs疔omEIA_Vw．detypestrain(EIAv—LN)，donkeyleul(ocyte甜enuatedEIAV(EIAv-DLA)，donkeyfbtalderfnalcelIanenuatedEIAV(EIAv_FDD)，船wel硒t、vomutatedLTRc10nes．EIAVt啪s—actiVatorprotcin(1乱)wase“presse

7、dinmammalianexpressingVectorpCDNA3．1(+)柚dwasco-仃ansfectedwiIhd{仃erentLTRplasmidsinthedonkeyfetaldermalcellsTheCATassayshowedtatcanspecificallyincreasepromoteractivjtiesofElAv-FDDL1’R，mutatedFDDLTRs，butnotofLTRf而mEIAv_DLA．Themu能ionsintheTARa11dpoly(A)didnota彘cttheactivitiesinducedby1她