马胞嘧啶脱氨基酶A3Z3的多态性及抗马传染性贫血病毒作用.pdf

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1、第36卷第6期中国预防兽医学报VOl_36．No．62014年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．20l4doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．06．03马胞嘧啶脱氨基酶A3Z3的多态性及抗马传染性贫血病毒作用张泽力．-，马建，陈方锐，一，尹鑫2,3，曹苏亚1,2，艾有为，一，王玉龙，王晓钧z(1．东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨150040；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物研

2、究室，黑龙江哈尔滨150001；3．东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030)摘要：马胞嘧啶脱氨基酶家族成员之一的A3Z3分子(eqA3Z3)，可通过胞嘧啶脱氨基酶活性限制马传染性贫血病毒(EIAV)的复制。为研究eqA3Z3分子多态性与其抗EIAV活性之间的关系，本实验采用RT．PCR技术从10匹马体内扩增A3Z3基因，对获得的不同马体内A3Z3分子的序列进行比对分析，发现了两种不同于已报道eqA3Z3分子的突变体。将其克隆于真核表达栽体pcDNA，HA中，并分别与EIAV感染性质粒共转染293T细胞，

3、通过GSTPul1．down方法证明了3种分子均能够与EIAVGag蛋白相互作用。此外，westernblot结果显示3种分子均能够被包装进病毒粒子。同时荧光素酶活性结果表明3种分子具有相同的限制EIAV复制功能。以上研究结果有助于进一步深入了解和评价马属动物Apobec3分子抗逆转录病毒的作用。关键词：马A3Z3；多态性；马传染性贫血病毒；抗病毒作用中图分类号：S852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)06．0427．04Thepolymorphismofequinecytosined

4、eaminaseA3Z3anditsanti—equineinfectiousanemiavirusactivityZHANGZe—li’，MAJian2，CHENFang-mi一，YINXin2，CAOSu-ya，AIYou—wei．-，w．ANGYu—long．WANGXiao-jun。(1．CollegeofWildlifeResource，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China；2．DivisionofLivestockInfectiousDiseas

5、esStateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciencesHarbin150001，China；3．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China)Abstract：EquineA3Z3，oneofthemembersofcytosi

6、nedeaminasefamily，hastheabilityofinhibitingthereplicationofequineinfectiousanemiavirus(EIAV)bycytosinedeaminaseactivity．ToinvestigatetherelationshipbetweeneqA3Z3polymorphismsandtheirantiviralactivity，eqA3Z3geneswereamplifiedfromtenhorsesbyRT—PCR．Thenthesequen

7、cesofeqA3Z3wereanalysed，andtwonewmutantsofeqA3Z3geneswereidentified．ThesethreegeneswereinsertedintotheeukaryoticexpressionvectorpcDNA—HA．TheinteractionbetweeneqA3Z3andEIAVGagwasdetectedbyGSTPull—downwhichwasfollowedbyCO—transfectingtherecombinanteqA3Z3plasmid

8、sandEIAVinfectiousplasmidinto293Tceils，theresultrevealedthatthreetypesofproteinswereabletointeractwithEIAVGag．Additionally，theresultofwesternblotshowedthatthreeeqA3Z3werealsoabletobepacka