浅析PCR技术在食品检验中的应用.pdf

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1、应用技术●I浅析PCR技术在食品检验中的应用田雪冬(淄博市食品药品检验所255000)[摘要]食品行业属于环环相扣的生产、运营过程，食品不可避免在生产、流转及销售等环节受到各类微生物的污染，影响品质，因此我国实行微生物检测是监督食品安全的重要手段。PCR技术凭借其操作便捷、检测快捷及准确率高等优势，为我国食品行业的发展及国民身体健康奠定保障。因此，PCR技术的应用不仅利于民生基础设施，且利于我国与国际间的贸易发展，具有重要意义[关键词]PCR技术，食品检验；聚合酶，DNA中图分类号：TS207文献标识码：A文

2、章编号：1009-914X(2014)27—0385-011．常规PCR检溯2．4巢式PCR常规PCR检测原理是在存在DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液和MgCl2巢式PCR(nestingPCR)是指先后用两套引物进行扩增的PCR技术，用内溶液的反应混合物中，在热稳定DNA聚合酶的催化下，对一对寡核苷酸引物所外两对引物先后扩增靶基因片段。通常是先用第一套引物扩增15"30+循环，再界定的DNA片段进行扩增。这种扩增是通过模板DNA、引物之间的变性、退火用已扩增的DNA片段内设定的第二套引物扩增l53O个

3、循环。(复性)、延伸等三步反应为一个周期，循环进行，使目标DNA片段得以扩增。其2．5免疫一PCR三个基本反应步骤为：(1)模板DNA的变性模板DNA经加热至93~C左右一定时免疫-PCR由Sano等首创，是指用DNA分子作为标记物，在做一般的免疫间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以反应的同时进行PCR扩增和电泳分析的免疫试验。在免疫一PCR中，多用生物便它与引物结合，为下轮反应做准备，(2)模板DNA与引物的退火(复性)模板素作为连接分子。生物素具有两个独立的结合位点，

4、一个可与DNA分子结合，DNA经加热变性成单链后，温度降至55~C左右，引物与模板DNA单链的互补序另一个能与抗原2抗体复合物上的亲和素结合，由此将DNA分子和抗原一抗体列配对结合；(3)引物的延伸DNA模板——一引物结合物在TaqDNA聚合酶复合物专一性地连接在一起，形成抗原一抗体一亲和素一生物素一DNA复合物，的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，然后加入PCR扩增系统，标记的DNA便可。合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。这就完成了一个PCR循环，2．6荧光

5、定量PCR新合成的链都可作为下一次反应的模板，因此扩增产物的量是以指数级方式增实时荧光定量PCR是将荧光能量传递技术(FIET)应用于常规多聚酶链式加。反应仪中，通过受体发色团之间偶极一偶极相互作用，能量从供体发色团转移2．多■PCR到受体发色团，受体荧光染料发射出的荧光讯号强度与DNA产量成正比，检测多重PCR是PCR技术的一种，是指在同一反应体系中加入两对或两对以PCR过程的荧光讯号便可得知靶序列初始浓度，从而达到定量目的。上引物，同时扩增多个目的基因或DNA序列。首先将双链DNA热变性成单链2，7热起动

6、PCRDNA，然后，人工合成的引物与单链DNA靶序列结合，在4种碱基dNTPs底物热起动PCR指的是使TaqDNA聚合酶只在样品温度超过至少70"C时才发存在下，在DNA聚合酶作用下，引物沿着DNA单链从5末端到3末端方向延挥作用的PCR。热起动可减少非靶序列的扩增，从而提高反应的特异性。热起动伸，合成新的双链。新合成的双链又作为模板，重复上面的聚合酶反应，合成新的基本方法是在进行PCR反应之初，将TaqDNA聚合酶、氯化镁和引物这些的DNA双链，经过20～35个循环扩增出大量拷贝。DNA合成所必需的关键性试

7、剂先不要加入样品管内，而将样品管加热，待温度2．1多重PCR的特点上升至70"(2以上时。再将上述试剂加入，开始PCR反应。高效性；系统性；经济简便性。3．结柬语22多重PCR在食品微生物检测中应用食品安全受到人们的广泛关注。食品在生产、包装、运输、销售等环节都会(I)多重PCR在食品病原微生物检测中的应用。食品污染的病原菌主要包受到微生物得感染，对微生物的检测是食品安全检测中的一个中要组成部分，括肠出血性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺菌、弯曲菌、单核细胞增PCR技术的广泛使用可以很好的对微生物进行

8、检测，解决人们的食品安全问生李斯特菌、副溶血性弧菌、耐药球菌等，在检测这些微生物过程中，很容易受题。而PCR技术也随着近几年技术的不断进步，不断进行了改进，PCR技术都到其它微生物和本身变异株的干扰，造成假阳性和准确率不高的现象。目前，越在食品检验中发挥了重要作用。来越多的研究使用多重PCR检测这些病原菌。(2)多重PCR~E食品非致病菌检参考文献测中的应用。乳酸菌(LAB)是真空环境下的主要微生物