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1、生物技术通报·技术与方法·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2010年第2期PCR技术在食品微生物检测中的应用12王华刘斌(12中国环境管理干部学院生态学系,秦皇岛066004;上海交通大学农业与生物学院食品科学系陆伯勋食品安全研究中心,上海200240)摘要:PCR技术以其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点,广泛地应用在食品微生物检测的各个领域,尤其对培养困难的细菌检测和抗原结构复杂的细菌鉴定方面。介绍了几种PCR方法的原理,以及其在食品微生物检测中的应用情况。关键词:PCR微生物检测LatestApplicationofPCRTechnologyinFoodMicr
2、oorganismInspection12WangHuaLiuBin1(DepartmentofEcology,EnvironmentalManagementCollegeofChina,Qinhuangdao066004;2DepartmentofFoodScienceandBorLuhFoodSafetyCenter,SchoolofAgricultureandBiology,ShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai200240)Abstract:Thisarticlesummarizedtheprinciple,methodandapplicationinm
3、anyfieldsofPCRtechnology.PCRtechnologycouldbewidelyusedinthemicroorganisminspectioninfood.PCRhasthesensitive,differential,simple,convenientandfastvirtues,whichhavebeenusedinmicroorganisminspection,especiallyinbacteriainspectionincubateddifficultlyandwithcomplexstructureantigen.Keywords:PCRMicroorgan
4、ismInspection聚合酶链反应(polymerasechainreaction,板DNA、引物之间的变性、退火(复性)、延伸等3步PCR),是一种体外酶促合成,扩增特定DNA片段的反应为一个周期,循环进行,使目标DNA片段得以方法。该技术于1985年由美国的Karray等首创并扩增。由于每一周期产生的DNA片段均能成为下由美国Cetus公司开发。PCR技术已成为调查食品一次循环的模板,故PCR产物以指数形式增加。[1]源疾病暴发及鉴定相应病原菌的有用工具,可以提在1992年Rahn等利用沙门氏菌的invA基高检测灵敏度、缩短操作时间、提高检出率,有效检因设计了一对引物,第一次用PCR的
5、方法对沙门氏测食品中的致病微生物。随着人们对食品安全性要菌进行了检测试验。共检测了630株沙门氏菌,约求的不断提高,PCR技术以其特异性强、灵敏度高100多种血清型和21个菌属的142株非沙门氏菌。和快速准确等优点在食品检测领域得以广泛的结果显示,有两株S.litchfield和两株S.senftenberg应用。没有检测出,检出率为9914%。1常规PCR检测2多重PCR常规PCR检测原理是在存在DNA模板、引物、多重PCR(multiplexPCR)原理与常规PCR相dNTP、适当缓冲液和MgCl2溶液的反应混合物中,在同,只是在同一反应体系中加入一对以上的特异性热稳定DNA聚合酶的催化下
6、,对一对寡核苷酸引物引物,如果存在与各引物对特异性互补的模板,则可所界定的DNA片段进行扩增。这种扩增是通过模同时在同一个反应管中扩增出一条以上的目的收稿日期:2009211223基金项目:中国环境管理干部学院精品课建设基金(200809)作者简介:王华,讲师,研究方向:食品微生物检验与食品安全;E2mail:msnhuawang@126.com64生物技术通报BiotechnologyBulletin2010年第2期DNA片段。这种方法既保留了常规PCR的特异性、以区别出male2specific和SC(somaticphages)型噬敏感性,又减少了操作步骤及试剂,实现了一次扩增菌体。RN
7、ase试验能够显示DNA和RNA的噬菌体的同时检测多种微生物的目的。利用这一方法可以差别,再应用RT2PCR技术进行特异性的鉴定FR2同时检测多个目的基因或借助其交叉限制进行确NA噬菌体。F2specific大肠杆菌噬菌体总发现率为认。但多重PCR技术也存在较明显的不足,如扩增810%。平板计数的方法检测出FRNA大肠杆菌噬效率不高,敏感性偏低;扩增条件需要摸索与协调;菌体为615%,male2s
