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1、第23卷第2期Vol.23,No.22007年3月Mar.,2007PCR技术检测食品有害微生物的应用ApplicationsofPCRinthefieldoffoodbornepathogens叶云容元平YEYunRONGYuan2ping(广西工学院生物与化学工程系,广西柳州545006)(DepartmentofBiologicalandChemicalEngineering,GuangxiUniversityofTechnology,Liuzhou,Guangxi545006,China)摘要:介绍了PCR技术的原理及其在食品有害微生物检测引物
2、(Primer)、即左端引物和右端引物;该对引物与互补的中的应用,同时提出了尚存在的问题,并对其应用前景作了DNA单链碱基互补结合后,在有DNA聚合酶和4种dNTPs展望。底物存在的情况下,引物沿模板DNA链按5'→3方'向延伸,关键词:PCR检测;有害微生物;食品安全自动合成新的DNA双链。新合成的DNA双链又可作为扩Abstract:TheprincipleandapplicationsinfoodofPCRwereintroducedinthispaper.Thepresentproblemsandthefuturetrendsofthisres
3、earch增的模板,继续重复以上的DNA多聚酶链反应。经过25～techniquewerealsodiscussed.35次循环,可将靶DNA序列扩增近百万倍。Keywords:PCRinspection;Foodbornepathogen;FoodsafetyPCR技术最早应用于基因克隆和转基因检测,但由于其精确、微量的特点,已经广泛应用到其他领域。随着对一些现代食品行业,有很多有害的微生物严重危害食品的品主要食品微生物遗传性质了解的逐渐深入,许多致病菌的遗质和人们的健康,甚至会引起一些严重的疾病。而随着经济传背景进一步明了,PCR技术在食品检测中也
4、逐渐显示出其的迅速发展,对各类食品的需求也日益增大,因有害微生物应用前景。利用PCR方法对病原菌进行检测早在1992年就引起的各类食物中毒事件也逐渐增多。然而,使用传统的检[1]有报道,然而利用PCR技术从食品中检测病原微生物直测方法即非选择性和选择性增菌、生长法及血清学鉴定虽然到近几年才得到比较广泛的应用。比较准确,但费力、耗时,一般需4～7d才能完成。此外,低水平的病原菌污染,食品加工后导致菌体的“致伤”及食品其2PCR检测食品有害微生物的主要流程它成分的干扰等因素,使得传统的检测方法受到了一定的限2.1引物设计制。因此,急需一些快速、特异、敏感的
5、检测方法,以及时发PCR引物对扩增的特异性起着关键的作用,引物的优劣现致病菌,控制污染及其可能对人体健康产生的危害。分子直接关系到PCR扩增的特异性和成功与否。设计的准确性生物学技术的发展使得许多食品工作者得以寻求更为快速则取决于对所检测对象的遗传背景的了解。随着分子生物有效的方法来检测病原菌,以期增加敏感性和显著地减少检学的迅速发展,各种微生物的基因序列的逐渐明了,使得引测时间。其中,PCR技术是比较有效,也是应用得最为广泛物设计变得更为容易。同时,靶序列的选择也是决定PCR的一种检测方法之一。结果的关键因素,引物不同则扩增物不同,如果引物的设计1原
6、理不当,则直接影响对关键靶序列的选择,降低PCR检测的灵PCR(PolymeraseChainReaction)即聚合酶链式反应,是敏度和特异性,甚至完全失败。因此,通常要求引物位于待1985年美国科学家Mullis发明的一种在体外快速扩增特定分析基因组中的高度保守区域,长度为18～30个碱基为宜。基因或DNA序列的方法,又称为基因的体外扩增法。原理2.2模板的制备是首先将靶DNA双链加热变性为单链,然后加入两段人工PCR检测方法的可靠性一部分依赖于目标模板的纯度合成的与靶DNA两端正邻近序列互补的寡核苷酸片断作为和足够的目标分子数量,大多数PCR检测
7、仍要求富集步骤。研究表明:如果在检测前细菌可从食品原样中进行分离、浓作者简介:叶云(1978-),男,广西工学院生物与化学工程系讲师。[2]缩、纯化,会使得检测效果得以改善。目前,离心、过滤、阴E2mail:yeemvan@126.com收稿日期:2006-11-29阳离子交换树脂、固定化凝集素和免疫磁性分离法等分离纯98食品安全与检测2007年第2期[2～4]化的方法已报道用于食品体系中细菌的浓缩。血性大肠杆菌已经成为世界性的重要的公共卫生和食品安2.3基因扩增全问题,曾在日本、美国、加拿大等国造成了暴发流行和大规[12,13]扩增DNA片断序列的不
8、同选择合适的PCR参数,如退模食物中毒事件。O157:H7大肠杆菌可引起出血性腹火温度、时间、
