鸡 PD 1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定.pdf

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1、河南农业科学，2014，43(10)：l12—116JournalofHenanAgriculturalSciences鸡PD—胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定李博文，孙国鹏，王爱国，岳锋，张艳芳，朱艳平，银梅，杨媛h，郭东光，王选盔，(1．新乡学院生命科学与技术系／生物技术研究中心，河南新乡453003；2．河南科技学院动物科学学院，河南新乡453003)摘要：为研究鸡程序性细胞死亡因子1(PD一1)胞外区的生物学活性，根据GentMnk中的鸡PD—j基因序列，经生物信息学比对分析，设计鸡PD—j胞外区特异性克隆引物，

2、扩增目的基因，连接原核表达栽体pET一28a(+)，构建重组表达载体pET一28a—PD一1，转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌，并对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化，对表达产物进行SDS—PAGE和Westernblot分析，应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示，成功克隆了鸡PD一】胞外区基因；SDS—PAGE和Westernblot分析结果表明，37℃、0．1mmol／LIPTG诱导4h时，PD一1胞外区融合蛋白表达量最高，以包涵体形式存在；流式细胞术分析结果表明，PD一1胞外区重组蛋白具有

3、一定的生物学活性。关键词：鸡；程序性细胞死亡因子1；胞外区；克隆；原核表达；生物学活性中图分类号：$855．3文献标志码：A文章编号：1004～3268(2014)10—0112—05Cloning，ProkaryoticExpressionandBiologicActivityIdentificationofChickenPD-1ExtracellularRegionGeneLIBo—wen，SUNGuo—peng，WANGAi—guo，YUEFeng，ZHANGYan—fang，ZHUYan—ping，YINMei，YANGY

4、uan¨，GUoDong-guang，WANGXuan—nian，(1．DepartmentofLifeSciencesandTechnology／Biotechno10gyResearchCenter，XinxiangUniversity，Xinxiang453003，China；2．CollegeofAnimalSciences，HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China)Abstract：Inordertostudythebiologicalactivi

5、tyofchickenPD-1extracelluarregion，theextracellularregionprimersweredesignedandthechickenPjextracelluarregiongenewasclonedaccordingtOP工)_1geneinGenBankbybioinformaticseomparation．ThepurifiedfragmentwasligatedintopET-28avector，ligatedDNAwastransformedintheE．colistrainRo

6、setta(DE3)afteridentificationbysequencing．TheidentificationofexpressionproductbySDS—PAGE．westernblotandflowcytometryafteroptimizingthevariousexpressionconditionssuchasconcentrationofIPTGanditsactiontimeandtemperature．TheresultshowedthatthechickenPD—jextracelluarregion

7、genewassuccessfullycloned．PD-1presentedasaformofinclusionbodiesanditsexperssionwashighestwhenitwasinducedbyadditionofIPTGtoafinalconcentrationof0．1mmol／Lfor4hat37℃．MeanwhiletheresultofflowcytometryshowedthattherecombinantproteinofP【)’1extracelluarregionretainedsomebio

8、logicactivity．Keywords：chicken；PD-1；extracelluarregion；clone；prokaryoticexpression；biologicalactivity收稿日期：2014一O5—19基金项目：国家自