抗巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及临床初步比对检测.pdf

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1、检验医学与临床2Ol4年12月第11卷第23期LabMedClin，December2014，Vo1．12，No．23·3269··论著·抗巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及临床初步比对检测陈兰兰，崔京涛，倪安平△，闫文娟(中国医学科学院北京协和医院检验科，北京100730)【摘要】目的制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体并建立外周血巨细胞病毒抗原血症免疫荧光检测方法。方法cMVAD169感染人胚胎肺成纤维细胞MRc5后24、48、72h，超声波破碎和甲醛灭活制备CMV抗原，以及CMVpp65重组抗原免疫BAIB／C小鼠，标准方法制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体。利

2、用所得单克隆抗体建立检测外周血巨细胞病毒抗原血症检测的实验方法，并与进口试剂盒CMVBriteKit进行比对。结果共有两株杂交瘤细胞产生特异性抗体，克隆名称为13D1—3和29F1—1，免疫球蛋白亚型分别是IgG1型和IgG2a型，制备的腹水抗体纯化后仍具有良好的免疫学特性。单克隆抗体13D1—3与CMVBriteKit试剂盒比对，阳性符合率为88．8，阴性符合率为98．9，总符合率为97．3／00，Kappa值为0．895，吻合度较高。结论成功制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体，建立以13D1—3单克隆抗体为基础的检测外周血巨细胞病毒抗原血症方法，与CMVBriteKi

3、t试剂盒比对具有良好的符合性。【关键词】巨细胞病毒；单克隆抗体；抗原血症DoI：10．3969／j．issn．1672-9455．2014．23．015文献标志码：A文章编号：1672—9455(2014)23—3269-03ThepreparationofmonoclonalantibodiesagainsttheCMVpp65antigenandpreliminaryclinicalcomparisontestCHENLan—lan，CUIJing—tao，NJAn—ping，yAN肌一juan(DepartmentoJClinicalLaboratories，Chi

4、neseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Beijing100730，China)[Abstract]ObjectiveTopreparemonoclonalantibodies(McAbs)againsttheCMVpp65antigen，andestab—lishimmumofluorescencemethodfordetectionofCMVantigenemiainperipheralbloodleukocytes．Methods24，48，72hafterCMVAD169infectedhu

5、manembryoniclungfibroblast(MRC一5)，CMVantigenwaspreparedthroughul—trasonicfragmentationandformalininactivation，BAIB／CmicewereimmunonizedbytheCMVpp65antigens，andthestandardmethodwasusedtoproducemonoclonalantibodiesagainsttheCMVpp65antigen．Thepreparedmono—clona1antibodieswereusedtoestablishi

6、mmumofluoreseencemethodfordetectionofCMVantigenemiainperiphera1bloodleukocytes．andtheestablishedmethodwascomparedtoCMVBritekit．ResultsTherewastwohybridomacellsproducingspecificmonoclonalantibodies．andnamed13D1—3and29F1—1。respectively．Theimrnunoglobulinsub—typeswereIgG1andIgG2a．Afterpurifi

7、cation，monoclonalantibodiesofascitesfluidalsohadgoodimmunologicalcharacteristics．Comparedmonoclonalantibody13D1—3withCMVBritekit，thepositivecoincidenceratewas88．8，negativecoincidenceratewas98．9andthetotalcoincidenceratewas97．3o,4(kappa=0．895)，predictedhighconsistenc