人巨细胞病毒糖蛋白b单克隆抗体制备、鉴定及初步应用

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1、浙江大学硕士学位论文人巨细胞病毒糖蛋白B单克隆抗体制备、鉴定及初步应用姓名：李敏环申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：范骏201202浙江大学硕士学位论文中文摘要人巨细胞病毒糖蛋白B单克隆抗体制备，鉴定及初步应用浙江大学医学院临床诊断学硕士研究生李敏环导师范骏中文摘要研究背景人巨细胞病毒(HcMv)在人群中普遍感染，对于免疫系统发育不全和免疫抑制患者可引起严重并发症．包膜糖蛋白B(gB)是参与感染过程的关键蛋白，与病毒粘附、穿入宿主细胞及细胞间融合、传播密切相关；是HcMv中和抗体的主要靶蛋白，

2、亦是疫苗研究的主要候选蛋白．研究HcMV二gB及其抗体对阐明HcMV致病机制及疫苗的研制有重要价值．本课题通过筛选和合成gB中具优势免疫原性的氨基酸短序列，并制备单克隆抗体，为HcMv．gB功能学研究，阐明HcMV致病机制和疫苗的研制打下基础．实验目的设计含优势免疫原性表位的HcMVgB多肽片段；获得特异的gB单克隆抗体；将单克隆抗体初步应用于gB抗原检测．实验方法以GenB诎公布的T0、釉e株、ADl69株序列为基础，筛选并合成两条gB多肽(sTRGTsATHsHHss和sHATssTHNGsHTs)；免

3、疫Balb／C小鼠，应用杂交瘤融合技术制备出gB单克隆抗体；采用ELIsA、免疫细胞化学染色法、免疫印迹、免疫沉淀等方法鉴定抗体性质。将制备的单克隆抗体应用于外周血白细胞样本的gB抗原检测。Ⅱ浙江大学硕士学位论文中文摘要实验结果制备得到单克隆抗体zJIJ．FH6sn犯憨^THs舳ss和ZJU-FE6sH郴sTHNGsH髑，分别为IgGl—1c和IgG2a-1c抗体亚型。经间接ELISA法鉴定，zJu．FH6效价为l：60000(初始浓度4m咖L)；zJu-FE6效价为l：240000(初始浓度1．2m咖L)

4、．免疫印迹和免疫沉淀显示ZJU．FH6和ZJU．FE6，均可识别变性的和天然的HCMVgB抗原。HcMV感染MRC．5的免疫细胞化学染色鉴定，刁U．FH6和zJu．FE6可检测T0wne株和ADl69株感染细胞的gB抗原。以制备的单克隆抗体检测Allo．HScT受者PBLs中的gB抗原，阳性率分别为79．1％和84．6％，平均阳性细胞数分别为6．20／5×1№C和6．88／5×104WBC，均无明显的统计学差异(P>O．05)。单克隆抗体zⅢ．FH6和zJIJ．FE6检测gB抗原阳性的朋10．HscT受者，

5、随后3个月的HcMVIE、pp65、IgG平均值均较之前3个月平均值有统计学意义下降(P

6、licationDepaIrtmentofClinicallaboratoryDiagnostics，CoUegeofMedidne'ZhejiangUniversi锣PostgraduateAdUsorMinhuanLiJunFanAbstractBacl【ground：Hum肌cytome鲥ovirlls(HcM叻isubiquit01lsilI恤h啪肌population．hlfectedw池HCMViniIllnnm0哗misedpati饥tc趾cauSesenouscoInplications．E

7、nVelopeglycoproteiIlB(gB)，om0ft11emoStilTlpona呲enVelope西ycoproteiIlsofHCMv，is螂1ic砌iIl栅adller钮Ce，蝴ceu．to·cell辨ad肌dmemsionofiIlf．ectedceUs．Itisasi嘶ficanttargctfor玳．utraliziIlg觚tibody嬲well嬲锄卸。删c锄didateforHCMvvacCine．ResearchesonHCMV-庐alldits锄tibodyhaVeasi蛳fic

8、锄timpona工赋forpamogellesisresearch觚d眦ciIlepr印锄tion·Ⅲsstudyist0preparemonodonal舳odiesagaillstspeci丘csaquencesofgB，砌chw0111dfad】iteresearchesofgB劬ction，pamogeIlesisa11dVaCCine．灿m：T0desi伊班p印tid既offavorablc㈣gcIlic