结核分枝杆菌CFP10和ESAT6优势肽段融合蛋白的表达及其免疫学研究.pdf

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1、2010年3月第7卷第7期·论著·结核分枝杆菌CFP10和ESAT6优势肽段融合蛋白的表达及其免疫学研究张晓娟，刘爱忠，于庭，张岩峰。，包洪(1．沈阳市胸科医院，辽宁沈阳110044；2．吉林大学第二医院，吉林长春130041；3．北华大学，吉林吉林132013)【摘要】目的：构建结核分枝杆菌分泌蛋白的重组质粒及工程菌，获得纯化的CFP10一ESAT6P蛋白抗原，制备初步用于检测结核病患者的特异性抗体。方法：根据编码结核分枝杆菌基因序列设计弓I物，克隆表达结核CFP10一ESAT6重组蛋白，表达产物免疫新西兰大白兔，其中80％可产生高价的抗体。利用产物建立IgG间接ELISA

2、方法鉴定其抗原性及实用性。结果：应用ELISA法，通过检测113例结核病患者、82例非结核病患者及健康献血员，CFP10一ESAT6P和对照PPD对结核病患者血清检测的敏感性分别为89．4％和79．6％，特异性分别为96．3％和93．9％。结论：高效表达纯化的CFP10一ESAT6蛋白抗原性强，可用于结核病患者抗体的检测，用于结核病的辅助诊断。『关键词1结核分枝杆菌；CFPIO；ESAT6；重组表达；抗体【中图分类号】R一33【文献标识码】A【文章编号】1673—7210(2010)03(a)一013—04ExpressionofCFPIOandmulti-epitopepe

3、ptideofESAT6fusionproteinfromMycobacteriumtuberculosisanditsimmunologicalanalysisZHANGXi610ju，LIUAizhong2,YUTin，ZHANGYanfeng3,BA0Hon(1．ShenyangChestBranchHospital，Shenyang110044，China；2．TheSecondHospitalofJilinUniversity，Changchun130041，China；3．NorthChinaUniversity，Jilin132013，China)[Abstra

4、ct]Objective：ToconstructtherecombinantplasmidandengineeringbacteriaforexpressionofMycobacteriumtU·berculosissecretionproteinCFP10-ESAT6Pandproduceantibodyfortestinghumantuberculosisantisera．Methods：DNAencodingproteinCFP10andESAT6-peptidewereamplifiedfromMycobacteriumtuberculosisH37Rvchromos

5、omalbyPCRusingprimerswhichweredesignedinaccordancewiththereportedgenesequence．ThepurifiedproteinwasinjectedintoNewZealandrabbitsand80％showedhighvalence．ThenantibodywasanalyzedbyELISAdependedonIgGfortest—ingtheantigenicityandpracticality．Results：Bytesting113casesofTBpatients，82casesofnoneTBp

6、atientsandhealthycandidatesbyusingELISA，thesensitivityandspecificityofCFP10-ESAT6PandcontrolPPDtotheantiserawerecon-pared，thesensitivitywas89．4％and79．6％respectively，andthespecificitywas96．3％and93．9％respectively．Conclu-sion：TheresultsshowhightiterpolyclonalantibodyagainstCFP10一ESAT6fusionpro

7、teinwasobtained．ItcanbeusedforhumantuberculosisantiseratestingandaideddiagnosisbyIgGdependedELISA．[Keywords]Mycobacteriumtuberculosis；CFPIO；ESAT6；Recombinantexpression；Antibody结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)是一种免疫系统识别，引发强烈的免疫反应。由于特异性细胞表位重要的人类及动物致病菌，