表达结核分枝杆菌esat6论文

《表达结核分枝杆菌esat6论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、表达结核分枝杆菌ESAT6论文张海1，师长宏1，王丽梅2，薛莹2，柏银兰2，徐志凯【关键词】分枝杆菌,结核；疫苗,DNA；ESAT6；CFP10；融合蛋白；免疫原性ImmunogenicityofDNAvaccineexpressingESAT6CFP10fusionproteinofMycobacteriumtuberculosis【Abstract】AIM:ToevaluatethehumoralandcellularimmuneresponseinducedbytheDNAvaccinee

2、xpressingESAT6CFP10fusionproteinandtotestitsprotectiveefficacyagainstMycobacteriumtuberculosis(MTB)challenge.METHODS:BALB/cmicemunizedintramuscularlythreetimesidpcDNAe6c10.Tmunization,thespecificantibodytiterandthestimulationindex(SI)ofspleenlymphocy

3、tesfromtheimmunizedmiceeasured,andthelevelsofIFNγandIL2andtheactivityofantigenspecificCTLiceingunit)MTBH37Rvthroughtailvein.Fourined.RESULTS:ThetiterofserumspecificantibodyinBALB/cmiceimmunizedmunizedgroups(2.42±0.13)munizedgroup.TheIFNγ［(2449±12)ng/

4、L］inducedbyDNAvaccinethatinbacilluscalmetteguerin(BCG)immunizedgroup,thatofsalineimmunizedgroupandmunizedgroup.TheantigenspecificCTLefficacymunizedmice(bacterialoadaticreductionofMTBreplicationiceimmunizedmunotherapeuticeffecttopreventtuberculosis.【K

5、eytuberculosis;vaccines,DNA;ESAT6;CFP10;fusionprotein;immunogenicity【摘要】目的：研究表达结核分枝杆菌ESAT6CFP10融合蛋白DNA疫苗在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对结核分枝杆菌（MTB）感染小鼠的保护能力.方法：以100μg重组质粒pcDNAe6c10接种BALB/c小鼠腓前肌，共免疫3次.末次免疫结束2ettequerin,BCG）可预防并减轻儿童的严重结核病（tuberculosis,TB），但对成人TB的预

6、防作用从0到80％不等［1］.因此急需研究一种比BCG更好的疫苗来控制该病的传播与蔓延.ESAT6抗原是结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,.freelega公司）.7H9液体培养基，BCG培养增强剂（albumindextrosecatalase,ADC）（Gibco公司）.6～8周龄BALB/c小鼠80只，雄性（第四军医大学实验动物中心提供），饲养于该中心P3实验室.1.2方法1.2.1BCG和MTB毒株H37Rv的培养和定量BCG疫苗株接种到7H9液体培养基（

7、含100g/LADC和0.5g/LTin离心10min，收集细菌，保存于-20℃备用.用7H9液体培养基系列稀释浓缩液，接种于罗氏培养基37℃培养2in，上清液过滤除菌后，加入终浓度为750g/L的饱和硫酸铵盐析，沉淀溶于PBS.用大量PBS溶液透析，再次过滤除菌后，紫外分光光度计法计算蛋白含量，用灭菌的PBS调整蛋白浓度为25mg/L，-20℃保存备用.1.2.3重组质粒大量提取将pcDNAe6c10阳性克隆菌接种于5mLLB液体培养基（含氨苄青霉素0.1mg/L），37℃振荡培养过夜.次日按

8、1∶100的比例扩大培养20h.质粒的大量提取及纯化按文献［4］进行.1.2.4动物免疫实验共分4组，每组20只，第1组以重组质粒pcDNAe6c10免疫，接种前小鼠后肢大腿内侧多点肌注2.5g/L盐酸布吡卡因50μL，24h后在一侧同一部位多点注射质粒，50μg/次；以同样的方法每隔2L（1×105CFU）的BCG经尾静脉途径接种小鼠，第3组为生理盐水对照组.末次免疫结束2L（1×105CFU）的H37Rv毒株只免疫一次，仅检测其诱导的CTL杀伤效应.三组免疫接种时间均与DNA疫苗初免时间相同