海南粗榧细胞悬浮培养体系的建立.pdf

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1、广东农业科学2014年第24期海南粗榧细胞悬浮培养体系的建立陈林，李永成(海南大学食品学院，海南海口570228)摘要：以海南粗榧愈伤组织进行悬浮培养，考察了培养基、维生素、蔗糖浓度、pH值、接种量对海南粗榧细胞悬浮培养体系建立的影响，并利用HPLC技术检测海南粗榧悬浮细胞和培养基中生物碱的含量。结果表明：海南粗榧悬浮细胞系培养的最适条件：MS为基本液体培养基、添加蔗糖35g／L+VB110mg／L、接种量6％、初始pH值5．5～7．0；发酵过程中每5d调节pH值至6．0，有利于细胞的生长和产物的合成；细胞的生长呈“s”型曲

2、线，细胞生长周期为30d，产物含量在培养25d时达到最大；细胞活力呈先急剧上升后缓慢下降的趋势。关键词：海南粗榧；愈伤组织；悬浮培养；生物碱；三尖杉酯类碱中图分类号：Q813．1文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)24—0054—04EstablishmentofcellsuspensionculturesystemforCephalotaxusmanniiCHENLin，LIYong—cheng(CollegeofFoodScience，HainanUniversity,Hmkou570228，China

3、)Abstract：UsingthecallusofCephalotaxusmanniiforsuspensioncultivation，thefactorsinfluencingtheestablishment0fCmanniicellsuspensionculturesystem，includingculturemedium，Vitamin，sucroseconcentration，pH，inoculumamount，wereinvestigated．Thealkaloidcontentincellsuspensionc

4、ulturesystemofC．manniiwasdeterminedbyHPLC．TheresultsshowedthattheoptimalmediumforthecellsuspensionculturewasMS+35g／Lsucrose+10mg／LVB1，theinoculumsizewas6％andinitialpHwas5．5-7．0．ItwasusefulforcellgrowthandharringtonineformatiotoadjustpHto6．0every5daysintheexperiment

5、．Thecellgrowthbasicallyaccordedwiththe⋯S’curveinoneculturecycle，thecyclewas30days，thegreatestproductswasobtainedatthe25thday．Thecellviabilitysharplyincreasedatfirstandgraduallydecreasedinlater．Keywords：Cephalotaxusmannii；callus；suspensionculture；alkaloid；harrington

6、ine海南粗榧(CephalotaxusmanniiHook．f．)为三尖杉DNA水平等对海南粗榧的遗传多样性、种群保护、生态科(Cephalotaxaceae)三尖杉属(Cephalotaxus)植物，别学特征进行了系统的研究。李志英等[101选用海南粗榧茎名红壳松、薄叶蓖子杉，属多年生高大常绿乔木[】]。主要段进行组织培养获得成功，小苗最高成活率达80％左分布于东亚和中南半岛北部，是三尖杉科植物中分布右。对保护海南粗榧具有重要作用。符文英等[41选用海最南的一种．主产我国海南省[21，属于国家二级保护濒南粗榧的茎尖、嫩树

7、皮、芽、茎段、幼苗根段的离体组织危植物[31。它的根、茎、叶和果实都含有抗癌功效的生物进行组织培养，最终获得了愈伤组织，并表明液体悬浮碱，其中三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱已在临床广泛应培养的细胞增殖比固体培养好，但未进行海南粗榧液用。由于遭到过度采伐利用，海南生长缓慢，自然资源体悬浮培养方面的研究。本试验研究了一些因子对海有限，很难满足日益增长的临床需求_5J。南粗榧液体悬浮细胞生长的影响，优化培养条件，建立目前对海南粗榧的研究主要集中在海南粗榧资源其悬浮培养体系。保护性、活性成分与其他产三尖杉酯类碱药源植物等1材料与方法方面D

8、u等从海南粗榧形态结构、染色体、同功酶、1．1试验材料收稿日期：2014—08—05以海南粗榧叶诱导得到愈伤组织，在液体培养基基金项目：国家自然科学基金(21166007)中进行悬浮培养，得到均匀分散的海南粗榧悬浮细胞。作者简介：陈林(1988一)，男，在读硕士生，E—mail：80502