翻译控制肿瘤蛋白TPT1的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用.pdf

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1、246ISSN1007—8738ChinJCellMolImmuno1)2010．26(3·论著·文章编号：1007—8738(2010)03—0246—04翻译控制肿瘤蛋白TPT1的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用赵一皤，李海芳，汤石明，王萌，吴海东，刘民，李欣，汤华(天津医科大学基础医学院生命科学中心实验室，天津300070)Expression，purification，antibodyprepa-结果：在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的rPrrl融合蛋白，经亲和树脂纯化后免疫大白兔，获得了高特异性的抗TPT1rationandidentificationoftumorp

2、rotein抗血清。结论：成功构建原核表达质粒pRSETA：．TP1’1，表达translationally·controlled1(ⅡyI'1)并纯化1蛋白，制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体．为进一步研究TPT1在肿瘤等疾病发生、发展过程及治疗中ZHAOri-fan，LIHai-fang，TANGShi—ming，WANG的作用奠定基础。Meng，WUHai-dong，LIUMin，Xin，TANGHua[关键词]TPT1；原核表达；纯化；抗体；肿瘤TianjinLifeScienceResearchCenter，BasicMedicalSchool，[中图分类号]R392

3、．11[文献标识码]BTianiinMedicalUniverzity，Tianjin300070，China翻译控制肿瘤蛋白唧’1是一种高度保守，高表[Abstract]A：Toexpressandpuritythefusionpro·teinofTPTI(tumorproteintranslationally-controlled1)in达的蛋白，其广泛存在于哺乳动物及其他各种动植prokaryocytesandtopreparerabbitanti-TPT1antibody．物中⋯。起初由不同的研究小组分别从人类乳腺癌METHODS：Theexpressionvector

4、pRSETA2-TPT1wasre·组织、小鼠肉瘤细胞系和红白血病细胞中发现1，constructedandtransformedintoB1_21(DE3)．TPT1fusion后来在多种肿瘤细胞和除肾细胞以外的所有正常proteinwasinducedbyIPTGandtheTPTIfusionprotein细胞中都发现其存在J。其编码基因为Tl(tumorpurifiedbvN_-N1-AHisBindresinwasusedtoimmunizetheproteintranslationally—controlled1)，是一种肿瘤生长rabbit．Thetiteroft

5、hepolyclonalantibodywasdetectedby相关的蛋白。然而近年来研究发现其具有各种生物ELISAanditsspecificitywasanalyzedbyWesternblotand学活性，可能参与重要的生物学功能，包括调节细胞lF(immunofluorescence)．RESULTS：TheTPTIfusionproteinwashighlyexpressedinEcoilandspecificpoly-周期的进程、细胞生长分化及精子发生和恶性转移、clonalantibodywasobtainedaftertheimmunization．CON-

6、钙结合蛋白、细胞外组胺释放蛋白、抗凋亡及抗疟疾CLUSIoN：Therecombinantprokaryoticexpressionvector作用等H’。还有研究表明，，I1PT1在人体肿瘤组织pRSETA2-TPTIissuccessfullyconstructedandhighexpres‘中的表达远高于正常组织J，尤其在肝癌，卵巢癌，sionofTPTlisinducedinEcoil．whichmaylaythebasis乳腺癌，前列腺癌等中的强烈表达可能与肿瘤的恶forfurtherstudyofthedevelopmentandtreatmentoftumors性

7、表型相关。本研究进行了原核表达TPI1l蛋白、纯andotherdiseases．化并制备其抗体，为进一步研究r1在肿瘤等疾病[Keywords]TPT1；prokaryoticexpression；purification；antibody；tumor发生，发展及治疗方面的应用奠定基础。[摘要]目的：原核表达并纯化翻译控制蛋白T1，免疫1材料和方法13本大耳白兔制备其抗体。方法：构建原核表达质粒pRSE-1．1材料人肝癌细胞HepG2的RNA逆转录产物，原核表TA，．rP，rl，转化大肠杆