胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究.pdf

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1、第40卷第2期J江．J汉ian大gh学an学U报niv(．(自Na然t．科Sc学i．E版d．))Vo1．40No．22012年4月Apr．2012胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究陈江源，刘洁，蔡建中，付云洁，刘志国(1．江汉大学卫生技术学院，湖北武汉430016；2．江汉大学文理学院，湖北武汉4300563．武汉工业学院生物与制药工程学院，湖北武汉430023)摘要：目的：探索用胶体金免疫层析法快速检测胆酸钠含量。方法：用碳二亚胺法合成的免疫抗原胆酸钠一BSA，免疫新西兰白兔，制备抗胆酸钠多克

2、隆抗体。用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定特异性抗体效价。制备胆酸钠一OVA抗原一胶体金复合物．组装检测试纸。结果：胆酸钠抗体的效价为1：80000，建立的胶体金快速测定法对胆酸钠的检测限为12g／mL。结论：试纸条法是快速检测胆汁酸含量的有效方式，在临床检测方面具有广阔的运用前景。关键词：胆酸钠；多克隆抗体；ELISA；胶体金；试纸条中图分类号：R392．7文献标志码：A文章编号：1673—0143(2012)02．0077—05胆汁酸是胆固醇在肝细胞内经酶催化的转化等许多领域得到了快速发展和应用，因

3、此，本文产物，是胆汁的主要成分，以钠盐或钾盐的形式通过制备抗胆酸钠多克隆抗体，为免疫学方法快存在于胆汁中。速检测胆汁酸含量的应用研究奠定了基础。胆汁酸代谢与胆固醇等脂类物质的消化、吸1实验材料及仪器收、代谢及调节关系密切。一方面，胆汁酸是胆固醇在体内代谢的主要去路；另一方面，胆汁酸雄性新西兰白兔，体重约2kg，华中科技大是具有亲水与疏水基团的乳化剂，在促进肠道脂学同济医学院动物中心提供；胆酸钠购于上海生类的消化与吸收方面发挥重要作用；此外，胆汁工生物工程有限公司；弗氏完全佐剂(Complete酸还具有调

4、节胆固醇的合成与转化的作用。胆汁Freund’Sadjuvant)、弗氏不完全佐剂(Incomplete酸代谢紊乱与胆结石、肝病的关系密切。例如，Freund’Sadjuvant)以及HRP一羊抗兔抗体购于武胆汁酸除可抑制胆固醇在胆汁中析出沉淀(结石)汉捷瑞生物有限公司；硝酸纤维素膜、玻璃纤外．还具有防止胆石生成的作用_1]，提高胆汁中维、吸收垫、样品垫均为美国Millipore公司产胆汁酸浓度，可降低胆色素浓度及抑制结石的形品；氯金酸(HAuC1·4H0)购于国药集团化学试成等作用E2]。剂有限公司；

5、紫外扫描仪：天美8500；冷冻离心结石及其并发的肝胆管癌以及各种肝病可引机：上海卢湘仪离心机仪器有限公司；透射电起血清胆汁酸量的变化口。近年来的研究表明：镜：JapanH600；单维平面划膜仪、切片机为上海血清胆汁酸是唯一可同时反映肝细胞分泌、合成金标科技有限公司产品；ELISA检测酶标仪：奥功能及肝细胞损伤状态三个方面的血清学指地利SUNRISE公司。标[53。因此，方便、快速及准确地检测胆汁酸的2实验方法含量，对于疾病的诊断具有重要临床意义。目前，临床上血清胆酸钠的测定多采用循环2．1抗胆酸钠多克隆

6、抗体的制备酶速率法和反相高效液相色谱法检测血清胆汁胆酸钠一牛血清白蛋白(BSA)免疫抗原的合酸¨3'，虽然这些检测方法的精密度可满足临床成方法为：将载体蛋白BSA100mg和胆酸钠检测的要求，但存在费时及检测设备昂贵等缺100mg按照1：1的比例混合在25mLPBS(0．02陷。近年来，免疫胶体金技术在早孕及HIV检测mol／L，pH7．4)中。混匀后加入水溶性碳化二亚收稿日期：2011—03—11作者简介：陈江源(1972一)，男，高级讲师，博士，研究方向：动脉粥样硬化的分子机制。78江汉大学学报(自

7、然科学版)总第40卷胺(EDC)75mg，搅拌1～2h，充分混合后在室温35rain，弃上清。然后用稀释液(含8％蔗糖，放置24h，然后反应液在0．15mol／L的NaC1溶0．05％Tween一2O．0．5％BSA的pH7．4的0．01液中透析3d．以除去多余的水溶性碳二亚胺。mol／LPBS)将沉淀恢复到原体积，再置于4c【=紫外扫描鉴定合成产物。低温冷冻干燥后即可获10000r／rnin离心35rain，取金标抗原沉淀，将得胆汁酸钠一BSA全抗原。用上述方法合成包被其恢复至原体积的1／10，即1m

8、L。4℃保存备抗原胆酸钠一卵清蛋白(OVA)。用C13]。采用常规免疫程序[7-8]免疫新西兰白兔，制2．3。2检测卡的组装与测试用划膜仪将0．5备多克隆抗体。选择体重2kg左右的雄性新西mg／mL的抗胆酸钠一BSA抗体与羊抗兔抗体在兰白兔4只，免疫2只，另外2只作为空白对NC膜上划线(180s／era)，分别作为检测线(T)和照。首次免疫时将2mg／mL完全抗原与完全弗氏质控线(C)，室温干燥后，浸人封闭液(pH7．2，佐剂按体积1：1混