集胞藻6803藻胆体藻蓝蛋白多克隆抗体制备及其初步应用.pdf

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1、广东农业科学2O10年第1l期集胞藻6803藻胆体藻蓝蛋白多克隆抗体制备及其初步应用张劲松，陈李萍，高复旦，杜玲瑜，王全喜，马为民(上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234)摘要：通过PCR扩增H{集胞藻6803C—PC编码基冈cpcA，构建表达质粒pET32a(+)-cpcA，转化大肠菌株BL2l(DE3)pLvsS，用IPTG诱导表达、经His—tag纯化后免疫日本大耳白兔获得多克降抗体。间接ElISA法揭示该抗体效价叮高达l：l025000：蛋向免疫印迹确定该抗体具有高度特异性。应该抗体进行蛋白免疫印迹检

2、测，结果发现C—PC蛋白在生K_光与高光培养条件下的数量，以及与2个光系统问的连结数量均存在著差异，为进一步研究藻胭体的杆在响应适应机制中所承担的重要角色奠定了生化基础。关键词：藻蓝蛋白；多克隆抗体；集胞藻6803中图分类号：Q949．2文献标识码：A文章编号：l004—874X(20l0)l1—000l-05Preparationandpreliminaryapplicationofpolyclonalantibody0fc—phyc0cyaninproteininthecyanobacteriumSynechocy

3、stissp．strainPCC6803ZHANGJin—song．CHENLi-ping，GAOFu-dan，DULing-yu．WANGQuan—xi，MAWei—min(Collegeof，JandEnvironmentSciences，ShanghaiNormalUniversity，Shanghai200234．Chinn)Abstract：Inthisstudy，theencodinggene，cpcA，wasPCRamt~lit'iedfromtheunicellularcyan0bacteriulnSy

4、necttocystissp．strainPCC6803，theexpressionplasmidpET32a(+)一epeAwasconstructedandtransformedintoBL21(DE3)pLysS，andtheexpressionofC—PCproteinwasinducedbyIFFG．Afterpurification．thefusionproteinHis—C—PCwasusedtoinmmnizeJapanesewhiterabbittoobtainthepolyclonalantibod

5、y．ThetiterofthepolyclonalantibodywasdetectedbyELISAanditsspecificitywasanalyzedbyimmunoblotting．Theresultsindicatedthatthetiterofpolyelonalantibodywas1：1025000，andpossessedhighspecificity．Further，theamountsofC—PCproteinwereanalyzedundertheacclimatizationoftheuni

6、cellularcyanobaeteriumcellstogrowthandhighlight，andbetweentwophotosystemsbyusingthepolyclonalantibody．TheresultsindicatedtheexistenceoftheremarkabledifferencesinC-PCproteinamountsunderthese2situations．ThiswillfurtherhelpUStorevealtheimportantrolesoftheperipheral

7、rodsofcyanobacterialphycobilisomesunderlyingtherespondingandacclimatingmechanjsmsKeywords：C—phycocyanin；Polyclonalantibody；Synechoostissp．strainPCC6803蓝藻是一类能进行光合放氧的原核生物，也是研传递至光系统反应巾心的主要入口。典型的藻胆体呈究光合作用的模式生物之一。藻胆体(phycobilisome)~现半圆饼状，主要南核心体和外围的杆两部分组成⋯蓝藻中主要的捕光天线，因

8、此是蓝藻细胞吸收光能．并其中，核心体主要是rb别藻蓝蛋白fallophycocyanin；APC)组装而成：而外围的杆主要由6个呈放射状的藻收稿日期：2010—04—18蓝蛋白(c-phycocyanin；C—PC)六聚体组装而成。包围在基金项目：国家自然科学基金(30770175)；圉家“973”计划项核心体的表面f图1)。藻胆