优秀单板U型场地滑雪运动员外周血淋巴细胞cDNA文库构建及ESTs分析.doc

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1、优秀单板U型场地滑雪运动员外周血淋巴细胞cDNA文库构建及ESTs分析　　摘要：��建一个优秀单板U型场地滑雪运动员血液的cDNA文库，经测序从中获取大量的表达序列标签ESTs，用于基因筛选和功能预测。方法：通过对多名优秀冰雪运动员血液样品的总RNA进行提取、混合总RNA，合成双链cDNA、蛋白酶K消化、Sfi1酶切并连接载体、λ噬菌体的包装，经扩增最终获得优秀冰雪运动员cDNA文库；随后从文库中随机挑选500个克隆提交至北京诺赛基因组研究中心有限公司进行测序，测序结果利用Chromas软件去低质量样

2、品，使用GenBank中的BLAST功能对所获序列进行比对获取相关信息，将获得的ESTs信息提交PANTHR和GO生物信息数据库进行基本归类分析，从中获取运动员cDNA文库中所涵盖的重要遗传信息。结果：得到滴度分别为1.32×106pfu/mL和1.65×1010pfu/mL的未扩增文库和扩增后文库，扩增后文库的重组率为90.6%；得到长度在300～1100bp序列360个，平均长度606bp；通过BLAST比对得出201条具有注释的基因信息，利用PANTHER数据库基本分析发现这些基因分布在27个p

3、athway上，其中TXN、MDH1、ARL1、ARPC3、ACTG1等基因分别分布在参与新陈代谢、氧化应激反应、心血管系统机能等相关联的信号通路上，推测其可能与运动能力存在关联。通过GO分析对所测序列进行归类得到在该数据库中具有功能注释的基因143个，参与31项不同功能，主要包括细胞组分、分子功能和生物过程。结论：构建了一个全长的运动员cDNA文库，其质量符合构建cDNA文库的标准。　　关键词：单板U型场地滑雪；外周血淋巴细胞；全长cDNA文库；表达序列标签　　中图分类号：G804.2文章编号：10

4、09-783X03-0254-05文献标识码：A　　Abstract：Objective：TheaimofthisstudyistoconstructacDNAlibraryofbloodfromelitehalf-pipesnowboarders.AndwecangetalargenumberofESTsfromitbysequencingthegenes.Wecanalsouseitforgenescreeningandfunctionprediction.Methods：ThecDNAlibra

5、ryofbloodfromelitehalf-pipesnowboarderswasconstructedbyaseriesofexperimentsextractingandmixingTotalRNAofseveraleliteice-snowathletes，synthesizingdouble-strandedDNA，proteinaseKdigestion，Sfi1enzymedigestion，connectingwithvector，packagingphageλandamplifica

6、tion.Then500clonesfromthelibrarywererandomlyselectedtobesequenced.Low-qualitysamplesintheresultsofsequencewereremovedbyChromassoftware.TherelevantinformationofESTswascapturedbymatchinggenesequenceswithBLASTofGenBank.ThentheinformationofESTswaspresentedt

7、oPANTHRandGObioinformaticsdatabasetomakeabasicclassificationandanalysisandtogetsomeimportantgeneticinformationinthecDNAlibraryofathletes.Results：ThetiterofcDNAlibraryunamplifiedwas1.32×106pfu/ml，andthetiterofcDNAlibraryamplifiedwas1.65×1010pfu/ml.Therec

8、ombinantrateofcDNAlibraryamplifiedwas90.6%.Wefinallygot360sequenceswhoselengthwerebetween300bpand110bp，andtheaveragelengthwas606bp.201Geneinformationwithannotationwasdistributedon27pathways，includingTXN，MDH1，ARL1，ARPC3，ACTG1andma