乳白香青中绿原酸含量的HPLC法测定.doc

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1、乳白香青中绿原酸含量的HPLC法测定　　摘要：建立高效液相色谱法测定乳白香青中绿原酸含量的方法。采用ＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８色谱柱；以甲醇∶０．０４％磷酸为流动相，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长３３０ｎｍ；柱温３０℃；进样量１０μＬ。绿原酸标准品的进样浓度在０．０１２～０．２４０ｍｇ／ｍＬ的范围内呈现良好的线性关系，　　ｒ＝０．９９９９，加标回收率平均值为１０１．２０％，ＲＳＤ＝１．３０％。高效液相色谱法精密度高，重现性好，是测定乳白香青中绿原酸含量准确、简便、有效的方法。　　关键词：高效液相色谱法；乳白香

2、青；绿原酸　　中图分类号：Ｏ６５７．７＋２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11405－1030-02　　　　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣｏｎｔｅｎｔｓｏｆＣｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃAｃｉｄｉｎＡｎａｐｈａｌｉｓｌａｃｔｅａｂｙＨＰＬＣ　　　　ＷＡＮＧＨｕａｎ，ＪＩＳｈｏｕ－ｘｉａｎｇ，ＨＵＭｉｎｇ－ｓｈａｎ，ＬＵＹｏｎｇ－ｃｈａｎｇ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅcｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｏｆＡｎａｐｈａｌｉｓｌａｃｔｅａｌＭａｘ

3、ｉmｂｙＨＰＬＣ．ＩｔｗａｓａｓｓａｙｅｄｗｉｔｈｚｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ．ＴｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆＭｅｔｈａｎｏｌ－０．０４％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１．０ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｎｇｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ３００ｎｍ，ａｎｄｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ３０℃．Ｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅｗａｓ１０μＬ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓａｇ

4、ｏｏｄｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆ０．０１２～０．２４０ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ１０１．２０％，ＲＳＤｗａｓ１．３０％．Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ＨＰＬＣｗａｓａｎａｃｔｕａｌｌｙ，ｓｉｍｐｌｅ，ａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｃｔcｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｉｎＡｎａｐｈａｌｉｓｌａｃｔｅａＭａｘｉｍ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ＡｎａｐｈａｌｉｓｌａｃｔｅａｌＭａｘｉm.；ｃｈlｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄ　　　　乳白香青属菊科香青属多年生草本植物，主要分布于

5、青海东部、甘肃南部及四川西北部。为常用藏药，全草用药，具有活血散瘀、祛风湿、消痞瘤、平肝潜阳、祛痰、平喘及外用止血、治风寒感冒、胃溃疡等功效［１－３］。绿原酸具有抗菌、抗病毒［４］、止血、抗氧化、消除自由基、抑制突变和抗肿瘤等作用［５］。　　对于乳白香青中的绿原酸的研究较少，尤其使用高效液相色谱法测定乳白香青中的绿原酸含量的研究在国内尚未见报道。试验以乳白香青为试验材料，甲醇为溶剂，采用超声的方法进行提取，使用高效液相色谱法对乳白香青提取液中的绿原酸的含量进行了测定，旨在为乳白香青的进一步开发利用提供参考。　

6、　１材料与方法　　１．１材料　　１．１．１试验药材乳白香青于２００９年７月采自青海互助北山林场，由中国科学院西北高原生物研究所孙洪发研究员鉴定，样品阴干后粉碎过８０目筛，冷藏保存。　　１．１．２试剂绿原酸对照品；甲醇为色谱纯，水为去离子水；其他提取试剂均为分析纯。　　１．１．３仪器高效液相色谱仪，ＫＱ３２００Ｂ型超声波清洗器，ＭＥ２１５Ｓ型电子天平。　　１．２方法　　１．２．１提取方法准确称取乳白香青样品粉末２．０ｇ，用１５ｍＬ９５％甲醇超声提取４５ｍｉｎ，同条件提取３次，过滤，合并滤液，用甲醇定容于５０ｍＬ

7、容量瓶中。混合均匀后经０．４５μｍ微孔滤膜过滤，滤液备用。　　１．２．2绿原酸定量根据ＤＡＤ检测器对绿原酸在２００～４００ｎｍ范围扫描，用高效液相色谱仪测定保留时间与对照品对比，制作标准曲线，采用外标法定量。　　标准曲线的绘制：精密称取绿原酸对照品１．２ｍｇ，用甲醇溶于５ｍＬ容量瓶中，定容至刻度，配制成０．２４ｍｇ／ｍＬ的标准储备液。取标准储备液０．１、０．４、１．０、１．２、１．６、２．０ｍＬ定容至２ｍＬ的流动相溶液中，配制成浓度分别为０．０１２、０．０４８、０．１２０、０．１４４、0.192、０．２４０ｍ

8、ｇ／ｍＬ的系列标准溶液，将标准溶液用０．４５μｍ微孔滤膜过滤，在下述色谱条件下进样１０μＬ。以峰积分面积为纵坐标，绿原酸的浓度为横坐标进行线性回归分析，绘制标准曲线：＝２３０．６ｘ－９３．９５，　　ｒ＝０．９９９９，说明绿原酸的浓度与吸光度在０．０１２～０．２４０ｍｇ／ｍＬ的范围内呈现良好的线性关系。　　１．２．3色谱条件ＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８色谱柱；流动相为甲醇∶０．０４％磷酸＝２３∶７７，流速