HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量.doc

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1、HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量作者：靳国印张世敏白雪梅田嘉铭【关键词】原酸复方胆通是临床常用的治疗急慢性胆囊炎，胆管炎，胆囊、胆管结石并感染，胆囊术后综合征，胆道综合性疾患等的中成药。具有清热利胆、解痉止痛的作用。由茵陈、胆通、溪黄草、穿心莲、大黄组成。方中君药茵陈主含6，7二甲氧基香豆素、绿原酸等成分[1]。本文建立了测定复方胆通片中茵陈的绿原酸含量的HPLC法，为评价该制剂中茵陈的质量指标提供依据。1仪器与试药HP1100高效液相色谱仪（Aglient公司产品，包括在线脱气机，四元泵

2、，柱温箱，VWD紫外检测器，3D化学工作站）。分析天平1/100000（日本产）。乙腈为色谱纯，水为三蒸水；磷酸为分析纯。绿原酸标准品（中国药品生物检定所，批号：07532000111供含量测定用）。复方胆通片（广东信宜市制药厂生产，批号：040102043102040502）。2方法与条件2.1色谱条件HypersilBDSC18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm）,检测波长327nm,柱温30℃，进样量20μl,流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液，梯度洗脱，程序见表1。色谱图见图1、2、

3、3。表1梯度洗脱情况　　2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取一定量的绿原酸对照品，用流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95定容，制备成每毫升中含绿原酸1mg的标准液备用。2.2.2供试品溶液的制备精密称取1.000g样品于10ml容量瓶中，用流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95溶解并稀释至刻度，超声提取30min，取出，过0.45μm滤膜，放4℃冰箱备用。2.2.3阴性对照液的制备按处方中药味的比例，自配不含茵陈的群药，按其工艺制成阴性对照，再按供试品溶液的制备方法制备并测

4、定。结果阴性对照液在与绿原酸对照品相同保留时间处无色谱峰，故认为无干扰。2.3线性关系考察将绿原酸对照品溶液用流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95稀释，依次配制成0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156mg·ml-1的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液20μ3l注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，含量(X)为横坐标作图，得标准曲线。回归方程为Y=38.389X-28.043，r=0.99992,结果表明在0.1562～0.500m

5、g·ml-1范围内线性关系良好。2.4精密度试验取同一供试品溶液,重复进样5次,每次20μl，测定峰面积积分平均值为2500.20,计算RSD为1.07%。2.5稳定性试验取待测样品溶液,分别于0、1、3、5、8h进样20μl,结果表明供试品中绿原酸在8h内稳定,RSD1.08%。2.6重复性试验精密称取一定量的同批样品5份,按2.2.2项下供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,测得平均含量为0.4018mg·g-1,计算RSD2%(n=5)，结果表明mg·g-1此法重复性良好。2.7加样回

6、收率试验精密称取已知含量的同批样品5份,精确加入绿原酸对照品,按正文供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,结果见表2。表2加样回收率试验结果2.8样品测定取样品溶液各20μl,以上述色谱条件,测定3批样品,测其峰面积用回归方程计算含量，结果见表3。表3样品含量测定结果3讨论3.1提取液的选定我们分别用甲醇、乙腈和不同比例的流动相提取，结果表明用初始流动相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95提取最完全，故选用此提取液。3.2波长的选择经紫外扫描，在280nm和327nm都有吸收，试验表明在32

7、7nm处绿原酸峰面积最大，分离度较好，且与参考文献报道[2]一致，故选327nm。3.3色谱柱的选择我们分别用HypersilBDSC18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm）和YWGC18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm），结果显示用HypersilBDSC18色谱柱（4.6mm×250mm,10μm）绿原酸出峰时间适中，分离度较好，故选用此色谱柱。3.4含量的差别从上述各表可以看出，虽是同一厂家的产品，但不同批号间含量的差别较大，可能与茵陈的产地、采收时间有关。所以，为控制中成药复

8、方胆通片的质量，应建立从原材料采购到工艺生产的一整套质量标准。3从以上实验看出，HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量，精确度高，重复性好，在0.1562～0.500mg·ml-1范围内线性关系良好.可作为复方胆通片中茵陈质量指标控制的一个方法。2007年2月靳国印等：HPLC法测定复方胆通片中绿原酸的含量第1期2007年2月河北北方学院学报（医学版）第1期【参考文献】1郑汉臣，蔡少青.药用植物学与生药学[M].北京：人民卫生出版社,2003.4222白雪梅，吴建翎，罗强,等.