茶多酚对缺血-再灌注大鼠p38信号通路及细胞凋亡的影响.pdf

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1、654陕西医学杂志2015年6月第44卷第6期茶多酚对缺血一再灌注大鼠p38信号通路及细胞凋亡的影响西安交通大学第二附属医院麻醉科(西安710004)赵红霞高滢摘要目的：研究全脑缺血再灌注后茶多酚对p38信号转导通路蛋白的表达及对大鼠海马cA1区细胞凋亡的影响，探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：126只雄性健康清洁SD大鼠随机分为3组，缺血再灌注组(IR，一42)，假手术组(PO，一42)，茶多酚干预组(TP，一42)。经典四血管阻塞法建立全脑缺血再灌注损伤模型，TP组给予腹腔注射茶多酚200mg／kg，时间在全脑缺血再灌注结束之后，其余两

2、组则给予等剂量生理盐水腹腔注入。各组均在再灌注后2、6、12、24、48、72h处死大鼠，提取脑组织制备病理切片，免疫组化染色观察磷酸化P鹂蛋白的表达；HE染色观察海马CA1区神经元形态结构的改变；TUNEL染色计算阳性细胞凋亡指数。结果：脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞在海马CA1区PO组少量表达，IR组显著表达(P<0．05)，TP组凋亡细胞表达在各时间点介于IR组和PO组之间(P<0．05)；与PO组比较，IR组在再灌注后各时点p38蛋白表达显著增强(P<0．05)，TP组较PO组表达增强但较IR组表达减弱(P<0．05)。结论：茶多酚可抑制大鼠全

3、脑缺血／再灌注损伤时的p38蛋白活性，进而减少海马椎体细胞凋亡，对脑缺血／再灌注损伤具有保护作用。主题词脑再灌注损伤细胞凋亡p38有丝分裂原激活蛋白激酶@茶多酚【中图分类号1R743．3【文献标识码】Adoi：lO．3969／j．issn．1000—7377．2015．06．005丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是真核生物细胞每个亚组7只动物。②模型制作及取材：实验动物采内重要的信号转导系统，参与细胞的生长、发育、分化用经典4-VO法建立全脑缺血／再灌注损伤模型。手和凋亡等一系列病理生理过程口]。MAPK家族主要术第1日，IR组及TP组先用微电凝将双

4、侧椎动脉凝包括ERK，p38MAPK和JNK通路3个主要成员。实断，缝合伤口后放入笼中；第2日，分离第1日凝断椎验结果显示，活化的磷酸化p38蛋白参与了机体免疫动脉大鼠的颈总动脉，然后用微动脉夹将双侧颈总动与应激反应过程中的细胞凋亡。在细胞凋亡发生后及脉夹闭6min，颈总动脉夹闭后在实验光源下观察到大时干预可明显减少由脑缺血后再灌注形成的继发损伤鼠瞳孔散大、嘴唇发绀、呼吸急促、眼球苍白等变化。所致的细胞凋亡的发生。茶多酚(Tea—polyphenols，若在颈总动脉夹闭2min内瞳孔不散大者予以剔除，TP)是由绿茶中提取的具有超强抗氧化剂作用的物不

5、计入实验动物总数，然后重新纳入新的实验动物同质，具有较强的清除人体自由基、抗癌、抗辐射、稳定心前方法造模，归入剔除的组内。PO组模型制作时仅血管系统功能等作用]。本研究探索在临床麻醉手术暴露出实验动物的颈总动脉及椎动脉，不凝断椎动脉中常见的脑缺血再灌注损伤后茶多酚对细胞凋亡的影和夹闭颈总动脉。再灌注结束后TP组给予腹腔注射响，为临床研究脑保护及保护机制提供帮助。茶多酚200mg／kg，其余各组注射等量的生理盐水。材料与方法③HE染色及免疫组织化学SABC法染色：见参考文1材料雄性清洁级Sprague-Dawley大鼠献l3]。④TUNEL法检测细胞

6、凋亡：见参考文献。126只，鼠龄55～65d，体重250±30g，实验动物均在3统计学方法采用SPSS13．0软件包进行统计标准实验条件下饲养1周，术前禁食12h。茶多酚(购学处理，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用方自美国Sigma公司)，原位末端标记细胞凋亡试剂盒差分析及LSDt检验，P<0．05为差异有统计学意义。(购自美国Promega公司)，SABC免疫组织化学试剂结果盒、DAB显色试剂盒和p38磷酸化抗兔多克隆抗体1HE染色见图1。PO组海马CA1区约有3(由北京博奥森生物科技有限公司提供)。～4层椎体细胞，排列整齐，胞质淡红，胞

7、核蓝染，核仁2方法①动物分组：126只Sprague—Dawley清晰。IR组镜下可见神经元数目明显减少，细胞浆呈大鼠随机分为假手术组(PO组)，缺血／再灌注组(IR嗜酸性变、细胞体深染、细胞膜及核膜皱缩、细胞核仁组)和茶多酚治疗组(TP组)。各组均按再灌注时间消失。而TP组大鼠海马CA1区神经元数目较缺血点的不同分为2h、6h、12h、24h、48h和72h6个亚组，再灌注组多，较假手术组为少，且细胞形态改变较轻，正常神经元与缺血损伤后神经元交错分布。*国家自然科学基金资助项目(30571790)2磷酸化p38蛋白免疫组化结果见图2，表1。陕西医

8、学杂志2015年6月第44卷第6期661结果聚体逐渐解离，与Bcl一2形成Bax／Bcl一2异源二聚体，1肺AI的变化见附