肝糖原贮备对热缺血再灌注大鼠肝细胞凋亡的影响

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1、肝糖原贮备对热缺血再灌注大鼠肝细胞凋亡的影响作者：陈文斌陈永亮卢灿荣梁斌【摘要】目的探讨肝糖原贮备对热缺血再灌注肝细胞凋亡及肝损伤的影响。方法建立大鼠肝热缺血模型。实验分组：术前24h静脉注射25%葡萄糖组，2ml/只，每6h1次，高糖饮食(H组)；术前禁食24h，饮水不限(L组)；正常饮食对照组(N组)和假手术组(S组)。缺血45min，再灌注2、24h取材。流式细胞术检测细胞凋亡及Bcl2、Bax蛋白。同时进行肝酶学检测、肝组织形态学观察。结果1.细胞凋亡及蛋白表达：(1)24h细胞凋亡百分率。S组N组(P<0.01)。2.肝酶学指标

2、：各时相点4组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，S组【关键词】肝细胞凋亡肝糖原热缺血再灌注损伤流式细胞术大鼠【Abstract】ObjectiveTostudytheroleofhepaticglycogenstorageinaffectinghepatocyteapoptosisandliverinjuryinratsischemia/reperfusioninjury.MethodsModelsofliverischemia/reperfusioninjury(aldietcontrolgroup)andGroupS(shamop

3、erationgroup).After45minutesofischemiaand2and24hoursofreperfusion,bloodetryandobservethechangesofpathologicalmorphology.Results(1)Apoptosisrateat24hoursinaincreaseorderGroupS,GroupH,GroupNtoGroupL(P<0.01),orethanthatinGroupN(P<0.01).ExpressionofBaxat24hourselevelinthesa

4、meperiodamongfourgroups(P<0.05),leasttohighestingroupsfromGroupS,GroupH,GroupNtoGroupL.(3)Pathologicalmorphologicalchangesafter24hoursofreperfusioninGroupHostsignificantchangeinGroupL.ConclusionPreventiveincreaseofglycogenstoragecanrelievehepatocyteapoptosisandinjuryinthep

5、rocessofliverischemia/reperfusionbymodifyingexpressionsofBcl2andBax.【Keyischemia/reperfusioninjury;Floetry;Rats肝脏热缺血再灌注损伤(ischemiaandreperfusioninjury,l/只，每6h1次，共4次，自由饮食。②正常糖原组(N组)：自由饮食。③低糖原组(L组)：术前禁食24h，饮水不限。以上各组进行实验时，动物麻醉后打开腹腔，无创血管夹夹闭肝蒂，45min后打开血管夹并关腹，再灌注2、24h后取材。④假手术组(S组)

6、：开腹骚扰腹腔，但不夹闭肝蒂，自由饮食，余同前组。每组16只(按缺血再灌注时相2、24h随机分为2个亚组，每组8只)。另取18只(6只尾静脉注射25%葡萄糖2ml/次，每6h1次，饮食不限；6只禁食24h，饮水不限；6只正常饮食)24h后剖杀取肝组织，苦味酸纯酒精饱和甲醛溶液固定，行糖原染色。陈文斌，等.肝糖原贮备对热缺血再灌注大鼠肝细胞凋亡的影响1.2.2动物模型的制备乙醚吸入维持麻醉，建立尾静脉输液通道，2ml肝素(100U/ml)尾静脉注射，生理盐水10ml皮下注射。打开腹腔，无创血管夹夹闭肝蒂(S组除外)，并开始计时。肝蒂夹闭后肝脏颜色逐

7、渐变深、肿胀、质地变硬，肠壁淤血。45min后打开血管夹并关腹，再灌注2、24h。1.2.3标本采集按缺血再灌注时相点心腔取血，肝素抗凝，3000r/min离心10min，留取血清置于－20℃冰箱中保存待检，用于测AKP、ALT、AST。各组取血后立即切取肝组织2份，分别以10%中性甲醛、70%酒精固定备检。1.3指标检测1.3.1细胞凋亡及Bcl2、Bax蛋白检测采用流式细胞技术进行。细胞凋亡采用溴化己啶染色法检测。Bcl2、Bax蛋白表达量采用细胞免疫荧光标记法检测。1.3.2肝脏酶学检测血清AST、ALT及AKP酶测定按试剂盒说明进行。

8、1.3.3病理组织学所取肝组织行常规石蜡包埋切片，HE染色，置光镜下观察肝脏病理变化。1.4统计学处理数据以±s表示，用SPSS10.0