达肝清对小鼠肝细胞异常凋亡的影响

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1、达肝清对小鼠肝细胞异常凋亡的影响【关键词】达肝清；肝细胞凋亡；流式细胞术；原位末端缺口标记　　　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofChineseherbpoundDaganqingonapoptosiscausedbyphenobarbitalice,andtoresearchthemechanismofitspreventingacuteliverinjury.MethodsTheapoptosismodeloflivercellsinmicecausedbyphenobarbitaledto

2、checkthechangesinapoptoticcells.Therateofhepatocyteapoptosis,thehepatichistopathologicchanges,tunnelchangeandliverbodyetryanalysisrevealedthattheapoptoticrateoflivercellsandliverbodyiddledosegroupsoreconspicuous,andthenumberofapoptoticcelloreinpositivegroupthanothergroup

3、s.ConclusionChineseherbpoundDaganqinginthedosagesof34g/kg，17g/kgcanobviouslyinhibitthelivercellapoptosiscausedbyphenobarbitalaybeoneofthemechanismsofDaganqingpreventingacuteliverinjury.　　Keya公司）,TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（德国RocheAppliedScience公司），其余试剂均为国产分析纯。　　1.4仪器　　显微镜（德国Leica公司），

4、TGL-16M低温超速离心机（湖南塞特湘仪有限公司），EL204电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司），HH-8数显恒温水浴锅(国华电器有限公司),EPICSXL型流式细胞仪（美国BeckmanCoulter公司）。　　2方法　　2.1动物分组及处理　　小鼠60只，雌雄各半，共分为6组，每组10只，分别为空白对照组,非凋亡对照组，凋亡对照组，达肝清高剂量组(34g/kg)，达肝清中剂量组(17g/kg)，达肝清低剂量组(8.5g/kg)。空白对照组ip无菌生理盐水，0.15ml/10g，1次/d，连续7d；非凋亡对照组ip0.5%P

5、B，0.8mg/10g，0.15ml/10g，1次/d，连续7d；凋亡对照组ip0.5%PB,0.8mg/10g,0.15ml/10g，1次/d，连续6d。其余各药物组，首先ip0.5%PB，0.8mg/10g，0.15ml/10g，1次/d，连续6d。从撤除PB开始灌胃给药，0.2ml/10g，1次/6h，至停PB后36h。将所有小鼠脱颈处死，取肝组织。　　2.2流式细胞仪分析　　取小鼠肝组织，分离肝细胞，用PBS洗涤细胞1次（离心2000r/min，5min）收集并调整细胞浓度为1×106/ml；细胞加9倍体积的70%冰乙醇,于-2

6、0℃固定至少12h；离心收集细胞后，用PBS洗细胞以除去乙醇，细胞重悬于500μlPBS中；加入RNaseA，使其终浓度为0.25mg/ml,37℃,反应30min；加入5μlPI室温避光染色30min；流式细胞仪检测凋亡率。　　2.5统计学处理　　所有数据通过SPSS11.0统计软件处理，计量资料以±s表示,两组间比较采用t检验,P<0.05认为有统计学差异。　　3结果　　3.1流式细胞仪分析凋亡率流式细胞仪分析表明（见表1），凋亡对照组凋亡率明显高于空白对照组及非凋亡对照组（P＜0.01）；与凋亡对照组比较，达肝清高、中剂量组

7、肝细胞凋亡率有显著差异（P＜0.01），达肝清低剂量组肝细胞凋亡率虽低于凋亡对照组但无显著性差异（P＞0.05）。表1流式细胞仪检测肝细胞凋亡率（略）　　3.2组织学改变及肝/体质量比如表2所示，与非凋亡对照组相比，凋亡对照组小鼠肝/体质量比回落13.5%，达肝清高、中、低剂量组分别回落1.2%，7.5%，8.4%。各组动物肝组织HE染色，高倍镜下可见（见图1，表2），凋亡对照组有散在凋亡小体，凋亡细胞胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象；达肝清高剂量组、中剂量组凋亡细胞数量明显低于凋亡对照组（P＜0.01），部分

8、肝细胞轻度浊肿变性，肝细胞间散在淋巴细胞浸润，汇管区有少量炎细胞浸润。表2组织学染色结果及肝/体质量比（略）　　3.3TUNEL反应凋亡对照组可见单个散在分布的凋亡细胞，凋亡细胞胞核着棕黄色或棕褐色,核固缩