加减三甲散及其拆方对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响

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1、加减三甲散及其拆方对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响【摘要】目的通过观察加减三甲散及其拆方对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响，部分阐明本方及拆方治疗肝纤维化的机理。方法使用四氯化碳诱导复制大鼠肝纤维化模型，观察各组对大鼠肝细胞凋亡的影响。结果各治疗组均能显著降低凋亡细胞数，与模型组比较，差异有非常统计学意义（P＜0.01）。结论加减三甲散及其拆方能够通过降低细胞凋亡对实验性肝纤维化起到一定的治疗作用。【关键词】加减三甲散滋阴肝纤维化肝细胞凋亡【Abstract】Objective:TopartlyclarifythemechanismofModifiedSanJiaPoula

2、sonhepaticfibrosisbyobservingtheEffectsofthemonhepaticcellApoptosisofratsodelinrats,andhepaticcellApoptosisistested.Results:AllthetherapeuticgroupscandecreasethelevelofApoptosis（P＜0.01）。Conclusion:ModifiedSanJiaPoulashavetheeffectsonexperimentalhepaticfibrosisbylog/片，批号：20080701，0.5mg溶于

3、10ml蒸馏水配成悬浊液，4℃冰箱保存备用。1.3实验试剂（1）四氯化碳分析纯专用试剂纯度≥99.5%质量标准GB/T688-1992密度1.592～1.598(20℃)四川航嘉生物医药科技有限责任公司批号：20080128，常温保存备用。（2）鲁花花生油山东鲁花集团有限公司，批号：3700116036。2实验方法110只大鼠随机分为正常对照组、病理模型组、阳性对照组、加减三甲散组、滋阴组、去滋阴药组，除正常对照组为10只外，其余各组各20只。除正常组外，其余各组均用四氯化碳腹腔注射造模，0.2ml/100g，首次0.5ml/100g，2次/周，共8周。加减三甲散组、

4、滋阴组、去滋阴药组造模同时给予药物治疗，每天上午8点灌胃，连续8周。给药剂量按有关成人日用量与大鼠的体重体表面积比折算为等效剂量分别灌胃给予相应药物，阳性对照组予秋水仙碱水溶液0.5×10-3g/kg，加减三甲散组给予加减三甲散浸膏11g生药/kg，滋阴组给予滋阴药物浸膏5.5g生药/kg，去滋阴药组给予去滋阴药物5.5g生药/kg。正常对照组和病理模型组给予等容积生理盐水。共给药8周。实验结束时，除空白对照组外，其余各组随机挑选10只大鼠放血处死后,取肝脏组织用中性甲醛固定,石蜡包埋、切片,采用末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)法检测肝细胞凋亡,

5、具体步骤按试剂盒要求进行。以细胞核呈棕黄色着色为阳性染色细胞，胞核无棕黄色着色为阴性细胞。每张切片随机取5个视野（高倍镜下）记数，取平均值为该片凋亡细胞数。实验结果采用SPSS11.5软件包进行统计学处理。3实验结果模型组大鼠凋亡细胞数高于空白对照组，差异有非常统计学意义（P＜0.01），各治疗组均能显著降低凋亡细胞数，与模型组比较，差异有非常统计学意义（P＜0.01）。加减三甲散拆方组（滋阴组与去滋阴药组）与加减三甲散组比较，差异仍然有显著统计学意义（P＜0.01）。4讨论细胞凋亡(Apoptosis)即程序性细胞死亡(programmedcelldeath,PCD

6、)，为非溶酶体核酸内切酶把细胞DNA切割成寡核苷酸体片断，继而使细胞裂解为凋亡小体。肝细胞凋亡是慢性肝病的一种重要病理改变,与肝纤维化密切相关[2]。Takehara等发现抗凋亡因子Bcl—XL敲除小鼠在肝细胞持续凋亡6个月后可形成肝纤维化，并且认为肝细胞凋亡能够导致纤维化[3]。本实验各治疗组均能显著降低凋亡细胞数，说明加减三甲散及其拆方能够通过降低细胞凋亡对实验性肝纤维化起到一定的治疗作用。肝纤维化现代病理认为，在病毒等多种因素作用下，肝炎病毒等整合于宿主肝细胞、免疫复合物形成、诱导自身免疫反应等，激发HSC，诱发纤维化病变，并伴随微循环障碍和血流动力学异常。而“

7、主客交”病理状态则认为久病阴精耗伤，邪气滞留，络脉瘀阻。加减三甲散全方透邪通络、滋阴养血，正邪兼顾，其中穿山甲、龟板、僵蚕、蝉蜕、土鳖虫为异类灵动之品，善通络，直入厥阴肝络，搜邪化瘀通络；桃仁、当归辛润通络；鳖甲、龟板、当归、白芍、甘草滋阴养血；柴胡疏肝行气确为治疗肝纤维化的有效方剂。课题：四川省科技计划项目(课题编号：2008JY0084)参考文献[1]程明亮，杨长青，刘三都等.肝纤维化的基础研究及临床[M].北京：人民卫生出版社，1996，17，183～186.[2]周滔，刘成海.肝细胞凋亡在肝纤维化中的作用[J].肝脏，2007，l2(6):5