活血开窍汤对大鼠脑缺血再灌注损伤NO含量及细胞凋亡的影响

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1、分类号：112—031密级：学位类别：科学学位口专业学位口学校代码：学号：学科门类：lO0622010602718医学夭洱酱科六垮了lA鞫JIN酗菱DleA薹_U鞫lVERSl鼍1硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：活血开窍汤对大鼠脑缺血再灌注损伤NO含量及细胞凋亡的影响TITLEEffectofHuoXueKaiQiao—decoctionontheNOcontentandcellapoptosisinmodelratswithcerebralischemia—reperfusionlnjury一级学科：中西医结合二级学科：

2、中西医结合临床论文作者：张丽丽指导教师：李平天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明IIIIIMMIHIIIIIIIIUlUlIIIIY2396470本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：袭压—翻R期：纠拜r月?9日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即

3、：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密口，在——年解密后适用本授权书。不保密区Z(请在相对应的方框内打“√”)学位论文导师期：功B铉膨日期：训弓铽黟日天津医科大学硕士学位论文中文摘要背景与目的脑血管病是严重威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病，具有高发病率、高致残率和高致死率的特点，其中70．80％是缺血性脑血管病IlJ。脑缺血再灌注损伤是缺血性脑梗死区在血液供应恢复后出现的更严重的脑损伤，其损伤发

4、生机制比较复杂，抑制再灌注损伤是治疗缺血性脑血管病的重要环节。尽管国内外研究者对此进行了大量的研究并取得一定进展，但仍缺乏有针对性的治疗策略【2．j1中药治疗缺血性脑血管病已有悠久的历史，具有疗效确切、不良反应少、药理作用广泛等优点，可以从多个层次和多个环节上起到保护作用，特别适合脑缺血所致的多种病理改变，日益引起医学界的关注14·J。．．．活血开窍汤是导师李平教授治疗缺血性脑卒中的经验方，该方由天麻、牛膝、寄生、远志、葛根、川芎、地龙、丹参、赤芍组成，具有活血开窍、补肾通络的功效。多年来的临床实践证明，此方在治疗缺血性脑卒中方面确有疗效。本实验研究通

5、过观察缺血再灌注大鼠脑组织中NO含量和神经细胞凋亡数的变化，探讨活血开窍汤对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制，进一步为临床用药提供理论和实验依据，以便推广应用。方法本课题采用Wistar雄性成年大鼠作为实验动物，研究活血开窍汤对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护机制。将大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、活血开窍汤治疗组。各组在相同条件下分笼喂养，实验开始第一天起给予治疗组活血开窍汤2．29／lOOmg／d灌胃，假手术组和模型组分别给予等量的生理盐水灌胃，各组每天灌胃1次，连续灌胃给药5天。至造模成功后继续重复手术前的给药方式致指定时间点。末次灌胃给

6、药后2h根据改良的Zea—Longa∞1线栓法制作大脑中动脉栓塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型，90min后实施再灌注。分别于再灌注后24h、48h快速将大鼠断头处死，完整剥取大脑组织，其中每组的半数制成脑组织匀浆液用于N0检测，另半数采用心脏灌注的方法固定大脑，用于染色以观察细胞凋亡和病理变化。将脑组织匀浆液天津医科大学硕士学位论文标本采用硝酸还原酶法测定N0含量，严格按试剂盒操作步骤完成。将用多聚甲醛固定的脑组织标本采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口术端标记(TUNEL)染色法检测神经细胞凋亡数。高

7、倍镜下观察，细胞核内棕黄色为阳性细胞，分别选择5个高倍视野计数TUNEL阳性标记细胞，计算平均每个高倍视野下100个细胞中的阳性细胞数。运用HE染色方法观察活血开窍汤对脑缺血损伤的组织形态学改变。结果：经实验观察，活血开窍汤治疗组大鼠缺血再灌注24h、48h后，病理显示模型组大鼠的脑组织神经细胞损伤数目较多，且损伤严重，而治疗组显示神经细胞损伤程度明显较轻。经测定，模型组大鼠脑组织中N0的含量及神经细胞凋亡数明显升高(P<0．01)，活血_丌窍汤治疗组N0的含量较模型组明显下降(P<0．05)，细胞凋亡数较模型组也显著减少(P(0．01)。结论活血开窍

8、汤能改善缺血再灌注大鼠的神经功能，可通过减少脑组织中NO的含量减轻其对脑组织的损害，实验结果亦