Ⅲ型前胶原氨基端肽的化学发光定量检测-论文.pdf

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1、中华实验和临床病毒学杂志2013年lO月第27卷第5期ChineseJExpClinViml，October2013，Vo1．27，No．5·385·．技术方法．Ⅲ型前胶原氨基端肽的化学发光定量检测刘佳，冯艳青，宋永继，侯俊，陈霖，赵静，刘爱霞，郭静霞，徐军，魏红山，李伯安【摘要】目的建立人血清中Ⅲ型前胶原氨基端肽(PII1NP)的定量微孔板化学发光酶免疫检测方法。方法辣根过氧化物酶标记PIINP单抗，选用鲁米诺化学发光体系检测，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、线性范围、稳定性等性能指标；并应用临床血清与进口试剂进行比对实

2、验。结果所建立方法的线性范围为0．8—85ns／ml，灵敏度0．5rig／ml，批内、批间变异均<10％。检测PⅢNP的临床高、中、低值血清回收率分别为96．2％、91．2％和101．1％；在4~C和37℃条件下分别进行了3d、5d．7d的稳定性考察，线性相关系数均>0．99，标准偏差<6％；比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义。结论成功建立了定量PmNP化学发光酶免疫分析方法，并且有较好的准确性、灵敏度、重复性，与进口试剂检测结果等效。【主题词】化学发光；前胶原；肝硬化；酶联免疫吸附测定QuantitativedetectionofserumproeollagenIRN-term

3、inalpeptidechemiluminescenceenzymeimmunoassayLIUJia，FENGYan—qing，SONGy-ji，HOUJun，CHENLin，ZHAOJing，Ai—xia，GUOJing—xia，XUJun，，Hong—shan，LIBo—an．CenterofClinicalLaboratory，eNo．302HospitalofePLA，Beng100039，ChinaCorrespondingauthor：LlBo-an，Email：lba@263．net；，Hong，shan，Email：drwei@ccmu．edu．cn【Abstract】ob

4、jectiveToestablishchemiluminescenceenzymeimmunoassay(CLEIA)forquantitativedetectionofprocollagen1IN—terminalpeptide(P1INP)inserum．MethodsAsandwichreactionwaspreformedwithhorseradishperoxidaselabeledmonoelonalantibodyofPRINPasthecatalyticenzymeandtheluminolastheluminescencereagent．Severalreactionsli

5、quid’Sconcentrationandreactionconditionswereoptimized．ThemethodwasevaluatedinaUaspectssuchaslinearrange，sensitivity，specificity，stabilityandSOon．TheCLEIAwascomparedwithimportedELISAkits，bydetectingclinicalserum．ResultsThelinearrangewas0．8-85ns／m1．Thedetectionlimitwas0．5rig／m1．Inter—assayandintra—as

6、sayRSDwerebothlessthan10％．Therecoveriesofthreedifferentspikedconcentrationsampleswere96．2％，91．2％and101．1％．Afterstoredat4℃and37~Cfor3，5，7days，theanalysisshowedcorrelationcoefficienthigherthan0．99andRSDlowerthan6％．ThedetectedresultsofclinicalserawithCLEIAcloselycorespondedtothosewithimportedELISA．Con

7、clusionEstablishedCLEIAforquantitydeterminationofserumPHINPhashighaccuracy。sensitivityandrepeatability．【Keywords】Chemiluminescence；Proeollagen；Livercirrhosis；Enzyme—linkedimmunoserbentassay1974年Taubmata等首先报