二烯丙基二硫化物对酒精诱导的小鼠肝脏氧化应激损伤的拮抗作用研究-论文.pdf

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1、中国基层医药2014年8月第21卷第15期ChinJPrimMedPharm，August2014，Vo1．21，No．15二烯丙基二硫化物对酒精诱导的小鼠肝脏氧化应激损伤的拮抗作用研究曾庆俊于丽华朱振平曾涛【摘要】目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对酒精诱导的小鼠肝脏氧化应激损伤的拮抗作用。方法SPF级雄性昆明小鼠50只，随机分为对照组、模型组和3个剂量DADS干预组(n=10)。DADS干预组小鼠分别经口给予25、50、100mg／kg体质量的DADS，其余2组动物给予等体积的玉米油，连续7d。末次给药2h后，模型组和DADS干预

2、组小鼠经口连续给予3次5g／kg体质量乙醇(每次间隔12h)诱导肝脏急性氧化应激损伤；对照组小鼠给予等体积等能量的麦芽糖糊精溶液。4h后，处死动物。测定血清转氨酶活性，制备肝脏石蜡切片进行HE染色观察肝细胞结构改变，检测肝脏抗氧化指标变化进行分子机制探讨。结果与对照组比较，模型组小鼠血清ALT和AST活性显著升高(均P<0．01)；与模型组比较，DADS干预组小鼠血清ALT和AST活性显著降低(均P<0．01)。与对照组比较，模型组小鼠肝脏MDA含量显著增加，GSH含量和SOD、GPx、GR活性显著降低(P<0．05或P<0．01)。与

3、模型组比较，3个DADS干预组小鼠肝脏MDA含量分别下降了29．3％、42．3％和46．4％(P<0．01)，GSH的含量分别增加了44．1％、25．2％和49．4％(P<0．05或P<0．01)。与对照组比较，模型组小鼠肝脏HO一1的蛋白含量下降了53．4l％(P<0．01)；与模型组比较，3个DADS干预组小鼠肝脏HO．1的蛋白含量分别增加了1．88、2．05和3．04倍(P<0．01)。结论DADS对急性酒精暴露诱导小鼠肝脏氧化应激损伤具有保护作用。【关键词】二烯丙基二硫；氧化性应激；肝炎，酒精性；血红素氧合酶．1氧化应激在酒精性

4、肝损伤的发病中起着至关重为5组，即对照组、模型组和3个剂量的DADS干预要的作用。因而，从抗氧化角度出发寻找天然的抗组(：10)。DADS干预组小鼠分别经口给予25、氧化剂用于酒精性肝损伤的防治一直是国内外学者50、100mg／kg体质量的DADS，其余2组动物给予研究的热点1-2]。二烯丙基二硫化物(diallyldisu1．等体积的玉米油，连续7d。末次给药2h后，模型fide，OAOS)是从大蒜中提取的一种有机硫化物，具组和DADS干预组小鼠经口给予5g／kg体质量乙有抗肿瘤、降血糖、抗氧化等多种生物学活性4。。醇，连续3次，每次

5、间隔12h诱导肝脏急性氧化应本研究拟建立急性酒精性肝损伤的小鼠模型，探讨激损伤，对照组小鼠给予等体积等能量的麦芽糖糊DADS对酒精诱导的小鼠急性肝脏损伤的拮抗作精溶液。4h后，小鼠经眼球取血后脱臼处死，迅速用，并从抗氧化角度进行机制探讨。剥离肝脏并分割成小块，取一小块肝组织经4％甲1资料与方法醛固定，其余一80℃保存备用。1．1材料DADS，购自sigma；丙氨酸氨基转移酶1．3血清转氨酶活性的测定血清转氨酶活性，采(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛用南京建成提供的试剂盒测定，具体操作严格按照(MDA)、谷胱甘肽(GSH

6、)、超氧化物歧化酶(SOD)、试剂盒说明书进行。谷胱甘肽还原酶(CR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)1．4肝脏抗氧化指标测定取适量肝脏组织，按照1：9(w／v)比例加入0．9％的冰冷的匀浆缓冲液测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；血红素(10mMTris—HC1，0．1mMEDTA．2Na，10mM蔗糖，氧合酶一1(HO一1)一抗购自Abcam。SPF级雄性昆明0．8％氯化钠溶液，pH=7．4)，冰浴中制备10％的肝小鼠50只，体质量l8～22g，由山东大学实验动物组织匀浆。4℃、3000rpm离心15min，上清液用中心提供。动物合

7、格证号为：SCXK(鲁)20030004。于肝脏MDA、GSH、SOD、GR和GPx水平的测定。1．2实验设计适应性喂养3d后，将小鼠随机分具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。DOI：10．3760／cmaj．issn．1008-6706．2014．15．0431．5病理学检查取小鼠的肝左叶的一小块组织，基金项目：山东省自然科学基金(ZR2011Hqo26)；中国博士后用4％甲醛固定48k后，石蜡包埋，制备5m的切科学基金特别资助(201104626)片，经二甲苯和梯度酒精脱蜡水化后，行苏木素-伊作者单位：262600山东省临朐县人民

8、医院药剂科(曾庆俊)；山红染色(H&E)染色，Olympus倒置显微镜进行观察东大学公共卫生学院环境与健康系毒理学教研室(于丽华、朱振平、曾涛)及代表性图片的采集。。通信作者：曾涛，Email：zen~ao