HBV血液大样本浓缩核酸检测方案研究-论文.pdf

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1、2014年7月第27卷第7期ChinJBloodTransfusionJuly，2o1，Vo1．27，No．7·725··论著·HBV血液大样本浓缩核酸检测方案研究周静宇蔡杰许纪玲(1江苏省血液中心江苏南京，210042；2南京红十字血液中心)摘要：目的采用实时荧光定量检测方法，验证病毒浓缩的效率以及病毒浓缩对检测的影响。方法模拟48人份样本混和后浓缩提取HBVDNA，聚乙二醇沉淀法进行病毒浓缩，进行HBVDNA实时荧光定量PCR检测，并分析浓缩效率及检测水平。结果10mL样本中HBV病毒浓缩的效率近90％，病毒检测水平优于100copies／mL。结论大样本混样后病毒浓缩效率理

2、想，能有效提高病毒的检出度及血液安全并降低检测成本。关键词：乙型肝炎病毒，核酸检测，实时荧光定量扩增，病毒浓缩中图分类号：R446．11R512．62文献标识码：A文章编号：1004—549X(2014)7-0725-03ThestudyofimprovedHBVdetectionbyvirusconcentrationfromlargevolumesam#esZHOU．~ngyu‘，CA1儿，XUJiling2．1JiangsuProvinceBloodCenter，Jiangsu210024，China；2NanjingRedCrossBloodCenter．Abstract

3、：ObjectiveToconcentrateandextractHepatitisBVirus(HBV)fromlargevolumesamples(10mL)，andthentoidentifytheefficiencyoftheviruseoncentrationanditsefectsondeteetionbyqRT—PCRMethodsHBVvirusw8sconcentratedbyhigh-speedcentrifugatiouwithPEG，andquantitativelydeterminedbyone—stepRT—PCR．ResultsThismeth-od

4、isusefulforHBVDNAtest．Theresultsindicatedthatviruscouldberecoveredabout90％fromlargevolumesampleswithrespectiveviralload．ConclusionTheconcentrationofHBVvirusinlargevolumesamplescanimprovethesensitivityofthevirusdetectionbyRT-PCR．Keywords：HepatitisBvirus，nucleicacidtest，qRT．PCR，virusconcentrati

5、on乙型病毒性肝炎(HepatitisBVirus，HBV)是国内最常见保存于负70℃冰箱。的传染病之一，在我国人群的持续感染率仍高达7．8％，严重1．2仪器及试剂高速离心机为BeckManAUegra15R，荧影响人们的健康和生活【】I2J，也对血液安全产生严重影响。光定量PCR仪为ABI公司7500，PEG6000购自(SigmaCat目前我国血液筛查HBV主要采用ELISA法和核酸检测(Nu-NO．81260)，病毒核酸提取试剂TaKaRaMiniBESTViralcleicAcidTest，NAT)法。随着免疫预防接种、高效价免疫球RNA／DNAExtractionKit

6、Ver．5．0(TaKaRaCatNO．9766)，荧蛋白的推广和应用，HBV的耐药性及核酸位点的变异，HBV光定量扩增体系TaqMan@PCRCoreReagentsKit(ABICat的核酸检测越来越受到重视。HBVDNA是HBV存在的最直NO．N8080228)，HBVDNA核酸标准物质(北京金豪制药股接的证据。也是HBV复制和具有传染性的重要标志物。核酸份有限公司CatNO．GBW(E)09o234，090235，090236，检测从分子核酸水平对血液病毒进行检测，能显著缩短血液090237)，引物及探针均由上海生工生物工程公司合成。病毒的“窗口期”，将HBV原50d的窗

7、口期缩短到25d，还能1．3方法避免病毒变异、免疫沉默性感染等造成的漏检。从而大大降1．3．1样本模拟混样取200已知阳性标本中与47人份低经血传播疾病的风险。几年前欧美日等发达国家已经陆续阴性样本混和，共计9．6mL样本，混匀，室温放置2h，每组将核酸检测技术作为一种常规手段纳入检测中，以提高血液样重复20次，10份进行浓缩，另10份取部分正常提取，对这的安全，并且取得了良好的效果”J。然而此项目检测成本高20组样本进行检测。也是不争的事实，这给推广应用带来很大的压力和障碍，多