Ghrelin对体外大鼠血管内皮细胞eNOS活性的影响及机制研究-论文.pdf

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1、中国实用医刊2014年1月第41卷第1期ChineseJournalofPracticalMedicineJan．2014，Vo1．41，No．1·1··论著·Ghrelin对体外大鼠血管内皮细胞eNOS活性的影响及机制研究赵荫涛邵莉杨海波李凌滕丽莉【摘要】目的探讨Ghrelin对内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)活性的影响和作用机制。方法分离培养大鼠主动脉血管内皮细胞并分为对照组(c组)和Ghrelin组。Ghrelin组加入终浓度为10、50、100和200nmol／LGh．relin孵育3h收集标本。采用Westernblot法测定内皮细胞eNOS和PKC蛋白表

2、达水平。结果与对照组相比，Ghrelin组eNOS磷酸化水平呈剂量依赖性增加(P<0．05)，PKC磷酸化水平呈剂量依赖性降低(P<0．05)。结论Ghrelin可提高内皮细胞eNOS的活性，其机制可能与PKC通路的失活有关。【关键词】Ghrelin；内皮；血管；一氧化氮合成酶；蛋白激酶cEfectofGhrelinonendothelalnitricoxidesynthaseactivityinvascularendothelialcellsofculturedratsanditsmechanismZHAOYin—tao，SHAOLi，YANGHai—bo，LIL

3、ing，TENGLi—li．DepartmentofCardiology，theFirst够filiatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofGhrelinonendothelialnitricoxidesynthase(eNOS)activityanditsmechanism．MethodsVascularendothelialcells(ECs)wereisolatedfromaortainratsandwer

4、ecultured．ECsweredividedintotwogroups：controlgroupandGhrelingroup．ThecellswereincubatedwithGhrelinindifferentconcen—tration(10，50，100and200nmol／L)for3hourinGhrelingroup．Theproteinexpressionlevelsofnitricoxidesynthase(eNOS)andprotienkinaseC(PKC)weremeasuredbyWesternblot．ResultsGhrelinca

5、nupregulatethephosphoryla—tedeNOSexpressionlevel，anddownregulatesignalconductionpathwayPKCphosphorylationinadosedependentmanner(P<0．05)．ConclusionsGhrelincanimprovetheactivityofeNOSinECs，anditmayberelatedtothelossofPKCac—tivity．【Keywords】Ghrelin；Endothelium；Vascular；Nitricoxidesynthase

6、；ProtienkinaseC近年来研究表明，内皮功能障碍是动脉粥样硬化、一氧化氮合成酶(eNOS)活性的影响并探讨其机制。高血压和胰岛素抵抗等发生的重要过程，而内皮细胞1材料与方法释放的活性物质一氧化氮(NO)可以调节血流、抑制炎1．1研究材料：大鼠Ghrelin购自美国ANASPEC公症反应和血小板的聚集，内皮功能失调时NO的减少司；Dulbecco’SmodifiedEagle’Smedium(DMEM)培养可以降低动脉斑块的稳定性、促进粥样硬化病变和血基、胎牛血清(FBS)和胰蛋白酶均购自美国GIBCO公栓形成、升高血压和降低胰岛素的敏感性，因此NO是司；二

7、甲基亚砜(DMSO)、牛血清白蛋白购自美国Sig—影响内皮细胞功能的重要物质。Ghrelin是1999年在ma公司；多克隆Ⅷ因子抗体购自美国Abbiotec公司；寻找生长激素促分泌素受体(GHS．R)的内源性配体辣根过氧化物酶羊抗兔IgG抗体购自美国Jackson公时被发现的，为一种促进生长激素释放的多肽¨。近司；B—actin抗体购自美国SantaCruz公司；总eNOS抗年研究发现，Ghrelin具有广泛的生理作用并与多种病体和磷酸化eNOS(p-eNOS)(1177)抗体购自美国Cell理生理过程密切相关，如肥胖、心血管疾病、糖尿病等SignalingTe