ghrelin对大鼠心肌梗死后血管重构影响和机制探究

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1、Ghrelin对大鼠心肌梗死后血管重构影响和机制探究[摘要]目的研究Ghrelin在心肌梗死(MI)后大鼠心肌血管重构中的作用及其可能的机制。方法成年SD雄性大鼠通过结扎冠状动脉前降支制作心肌梗死模型,假手术组开胸后剪开心包腔,但不结扎左前降支。心肌梗死Ghrelin组大鼠皮下注射Ghrelin,2次/d,剂量为100Pg/kg;心肌梗死盐水组皮下注射等量的生理盐水,观察4周。利用RT-PCR法检测VEGFmRNA表达,利用蛋白质印迹(Western-blot)法检测各组动物VEGF蛋白的表达,免疫组化法分析新生血管的密度。结果心肌梗死盐水组与心肌梗

2、死Ghrelin组24h内死亡情况分别为18.0%比16.0%(P>0.05)o术后存活24h的45只动物进行Kaplan-Meier生存分析显示,心肌梗死盐水组和心肌梗死Ghrelin组28d生存率为66.1%比81.2%(P>0.05)o与心肌梗死盐水组相比,Ghrelin显著增加梗死边缘区VEGFmRNA(0.65±0.05比0.35±0.03,P1.6免疫组织化学法分析新生血管的密度取梗死边缘区和非梗死左室心肌组织100〜150mg,免疫组化分析切片组织具体同文献[7]。小动脉被定义为圆形的,a-SMA阳性血管直径>10Pm,直径>20Um为

3、大动脉。通过免疫组化图像分析系统测量光学密度,分析血管密度。1.7统计学方法应用SPSS18.0统计学软件进行数据分析,计量资料以均数土标准差表示(x土s),多组间比较用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;以Kaplan-Meier曲线分析生存率。以P0.05)o术后存活24h的45只动物进行Kaplan-Meier生存分析显示,心肌梗死盐水组和心肌梗死Ghrelin组28d生存率比较,差异无统计学意义(66.1%比81.2%,P>0.05)o对死亡动物解剖分析未见到左室破裂,死亡原因多为急性充血性心力衰竭或心律失常。2.2Ghrelin对VE

4、GF表达的影响为了阐明血管生成的机制,在MI后的28d,收集边界区的心肌组织进行实时定量PCR方法和Westernblot分析方法对VEGFmRNA和VEGF蛋白含量进行测定。与假手术组相比,心肌梗死盐水组VEGFmRNA表达水平显著降低;与心肌梗死盐水组相比,心肌梗死Ghrelin组能显著提高MI大鼠降低的VEGFmRNA表达量(0.65±0.05比0.35±0.03,P[4]KishimotoI,TokudomeT,HosodaH,etal.Ghrelinandcardiovasculardiseases[J]・JCardiol,2012,59(

5、1):8-13.[5]WangL,ChenQ,LiG,etal.GhrelinstimulatesangiogenesisviaGHSRla-dependentMEK/ERKandPI3K/Aktsignalpathwaysinratcardiacmicrovascularendothelialcells[J].Peptides,2012,33(1):92-100.[4]AhluwaliaA,LiA,ChengG,etal.Reducedghrelininendothelialcellsplaysimportantmechanisticroleina

6、ging-relatedimpairmentofangiogenesis[J]・JPhysiolPharmacol,2009,60(2):29-34.[5]YuanMJ,HuangCX,TangYH,etal.Anovelpeptideghrelininhibitsneuralremodelingaftermyocardialinfarctioninrats[J]・EurJPharmacol,2009,618(1-3):52-57.[6]HaoX,Mansson-BrobergA,GrinnemoKH,etal.Myocardialangiogene

7、sisafterplasmidoradenoviralVEGF-A(165)genetransferinratmyocardialinfarctionmodel[J].CardiovascRes,2007,73(3):481-487.[7]KajdaniukD,MarekB,FoltynW,etal.Vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)-part1:inphysiologyandpathophysiology[J]・EndokrynolPol,2011,62(5):444-455.[8]SchwarzER,Spe

8、akmanMT,PattersonM,etal.Evaluationoftheeffectsofintram

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