乙肝病毒突变体HBx-d382特异性抗体的制备及鉴定-论文.pdf

《乙肝病毒突变体HBx-d382特异性抗体的制备及鉴定-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、784实用预防医学2014年7月第21卷第7期PractPreyMed，Ju1．2014，Vo1．21，No．7·论著·乙肝病毒突变体HBx—d382特异性抗体的制备及鉴定祝玲玲，朱平安，金娴，钟小婷，吴翔，樊春卉1．深圳市第七人民医院，广东深圳518081；2．中南大学湘雅医学院摘要：目的制备乙肝病毒x基因突变体HBx—d382特异性抗体。方法运用生物信息学和多肽合成法制备HBx—d382特异性多肽(HBx—d382P)，采用高效液相色谱法(HPLC)和电喷雾离子化质谱(EsI—Ms)测定合成多肽的纯度和分子量。用化学方法将多肽与匙孔血蓝蛋

2、白(KLH)偶联成多肽抗原一d382P—KLH，并经完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFlA)乳化，免疫新西兰雄性大白兔。用ELISA鉴定抗血清效价、亲和层析法纯化抗体、Dotblot评价抗体特异性。结果经HPLC和ESI—MS分析，合成多肽符合HBx—d382特异性抗体制备的要求。ELISA和Dotblot试验结果显示，兔抗血清的效价为6．4×10，纯化后的一d382抗体特异性高。结论获得了高效价高特异性的I-IBx—d382多克隆抗体，为进一步研制HBx—d382免疫检测试剂盒打好了基础。关键词：乙肝病毒；HBx—d382突变体；

3、多肽；特异性抗体中图分类号：R512．62文献标识码：A文章编号：1006—3110(2o14)07—0784—04DOI：10．39j．issn．1006—3110．2014．07．006n即嘶mantii~kation0feci6caraihoayagahlstHBxdeletionrolla_ntHBx—d382ZHLing—ling，ZHUPing—an，JINXian，ZHONGXiao—ting，WUXiang，FANChun—huiTheSeventhHospitalofShenzhen，Shenzhen，Guangdong51

4、8081，ChinaAbstract：ObjectiveTopreparespecificantibodyagainstHBxdeletionmutantHBx—d382．MethodsSpecificpolypep—tideofHBx—d382mutant(HBx—d382P)waspreparedbybioinformaticsandpolypeptidesynthesismethods，andpurityandmolecularweightofsyntheticpolypeptideweredeterminedbyusinghigh—p

5、erformanceliquidchromatography(HPLC)anddec—trosprayionizationmassspectrometry(ESI—MS)．Thepolypeptidewascoupledtokeyholelimpethemocyanin(KLH)toformacomplexofHBx—d382P—KLH．ThemaleNewZealandrabbitswereimmunizedwithHBx—d382P—KLHemulsifiedbycom—pleteFreund’Sadjuvant(CFA)andincom

6、pleteFreund’Sadjuvant(IFA)，andrabbitantiserawerepurifiedbyaffinitychromato—graphy．ThetiterofantiseraandspecificityofpolyclonalantibodyweredeterminedbyELISAandDotblotanalysisrespectively．ResultsTheresultsofHPLCandESI—MSanalysesshowedthatsyntheticpeptidecouldmeettherequiremen

7、tofHBx—d382specificantibodypreparation．Thetiterofrabbitantiserumwas6．4×10．DOtblotanalysisshowedthatthepurifiedanti—bodyreactedwithHBx—d382Ponly．ConclusionsTherabbitpolyclonalantibodyofHBx—d382Pwithhightiterandhighspecificityisobtained，whichcanpromotethedevelopmentofHBx—d382

8、mutantimmunoassaykit．Keywords：HepatitisBvirus；HBx—d382mutant；Polypeptide；Specifica