抗肠道病毒71型特异性卵黄抗体的制备及鉴定.pdf

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1、朱思思等抗肠道病毒71型特异性卵黄抗体的制备及鉴定第1O期·913·doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2011．10．012抗肠道病毒71型特异性卵黄抗体的制备及鉴定①朱思思赵肃清李月明温俊林(广东工业大学轻工化工学院，广州510006)中国图书分类号R392文献标识码A文章编号1000-484x(20l1)10-0913-05[摘要]目的：制备特异性抗肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)的卵黄抗体并检测其生物学性能，这对Ev71感染手足口病的预防和治疗具有重大的意义。方法：用纯

2、化并灭活后EV71作为抗原免疫健康产蛋鸡。采用本实验室水提综合聚乙二醇法提取纯化鸡卵黄抗体；用Bradford法测定卵黄抗体提取液的蛋白含量；还原性SDS-PAGE凝胶电泳分析测定提取蛋白的纯度及相对分子质量；分别用ELISA、双向免疫琼脂扩散检测纯化特异性卵黄抗体抗EV71效价；Westernblot分析特异性卵黄抗体的免疫反应性。结果：卵黄中卵黄抗体含量达7．76mg／n~，卵黄抗体的纯度为94．86％。初免10天后蛋黄中可检测到特异性抗EV71卵黄抗体，初免4JD天后ELISA检测抗体效价高达1：20480，双向琼

3、脂扩散检测效价达1：16。提取的卵黄抗体具有良好的免疫反应性，能与EV71特异性结合。结论：水提综合聚乙二醇法提取纯化得到的抗Ev71卵黄抗体产量和纯度高、效价好且具有良好的免疫反应性。[关键词]肠道病毒71型；卯黄抗体；手足口病；制备；鉴定Preparationandidentificationofspecificchickeneggyolkimmunoglobulinsagainstenterovirus71ZHUsi—si，ZHAOSu—Q，LIYue一，WENJun—Lin．LightIndustryInstit

4、uteofChemical，GuangdongUniversityTechnology，Guangzhou510006，China[Abstract]Objective：Preparingspecificitychickeneggyolkantibody(IgY)againstenterovirus71(EV71)anddetectingitsbiologicalactivities，thisissignificantforpreventionandtreatmentofEV71infection．Methods：Fou

5、rhenswereimmunizedthreetimeswiththepurifiedhumanEV71virusasanantigen．TheimmunoglobulinY(IgY)antibodyWasextractedandpurifiedfromtheegyolkbywatercombinepolyethyleneglycol(water-peg)method．TheyieldandmolecularmassofIgYwereanalysedbyBradfordmethodandSDS-PAGEelectmpho

6、re-sis．ELISAandAgardoubleimmunodifnsionwereusedfordetectthetiterofIgY，whiletheimmunoreactivityofanti-EV71IgYwastestedusingWestemblot．Results：TheyieldandpurityofIgYwere7．76mg／rI1land94．86％respectively．ResultsofELISAindicatedthatthespecifican—ti-EV71IgYantibodyappe

7、aredintheegyolk10daysafterprimaryimmunizationandreachedthehighesttiter1：20480after40days，whilethetiterofAgardoubleimmunodifnsionWas1：16．WesternblotanalysisrevealedthatthepurifiedIgYantibodyownedgoodimmunoreactivityandaspecifcalycombinationcapacityofEv71virus．Conc

8、lusion：EgyolkisalargescalesourceofantidodysspecifcallyagainstEV71virus．Theanti—EV71IgyextractedandpurifiedbyWater-PEGmethodpossessgoodproduction，purity，andbiol