开口箭乙醇提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡活性研究-论文.pdf

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1、中南药学2014年8月第12卷第8期CentralSouthPharmacy．August2014．Vo1．12No．8开口箭乙醇提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡活性研究谢锦艳，许苗苗，刘银环，宋蓓，刘越，刘海静，宋小妹(1．陕西中医学院药学院，陕西咸阳712046；2．陕西省食品药品检验所，西安710065)摘要：目的探讨开口箭根部乙醇提取物(ERT-95)对肝癌细胞HepG2生长的影响及其抗肿瘤作用的可能机制。方法采用MTT法绘制HepG2细胞生长曲线，检测ERT-95对HepG2细胞的生长抑制作用；采用光学显微镜观察HepG2细胞的凋亡形态变化；采用Hoc

2、hest染色原理检测HepG2细胞凋亡情况；采用Westernblot检测CytC蛋白的表达；采用caspase活性检测试剂盒检测caspase．3、caspase．9的活性变化：采用DNAladder凝胶电泳技术检测DNA的裂解情况。结果MTT结果显示，ERT-95对HepG2细胞的抑制作用呈剂量依赖性(／Q为52．57gg·mL)；光学显微镜下，处理组细胞出现皱缩、变圆等形态变化：Hochest．33258染色后的处理组细胞呈现典型的凋亡结构；Westernblot结果显示，随着药物浓度增加，CytC蛋白表达上调；caspase活性检测显示，caspase-

3、3、caspase-9活性逐步升高；与对照组相比，处理组琼脂糖凝胶电泳图谱出现DNA条带。结论ER195有显著的体外促肿瘤细胞凋亡作用，初步研究其促肿瘤细胞凋亡机制是通过线粒体释放cVtc，进一步活化caspase一9和caspase．3而激活内源性核酸内切酶，导致DNA裂解而实现的关键词：开口箭；抗肿瘤；机制；肝癌细胞HepG2中图分类号：R285，R965文献标识码：A文章编号：1672．2981(2014)08—0735—05doi：10．7539~．issn．1672-2981．2014．08．004Antitumoreffectofethanolext

4、ractfromtherootofTupistrachinensisBaker．onthelivercancercelllineHepG2XIEJin-yan，XUMiao-miao，LIUYin．huan，SONGBei，LIUYue，LIUHai-jing，SONGXiao．mei(1．SchoolofPharmacy，ShaanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，XianyangShaanxi712046；2．ShaanxiFoodandDrugInspectionOfice，Xi’an710065)Abstr

5、act：ObjectiveToobservetheantitumoreffectofethano1extractfromtherootofTupistrachinensisBaker．(ERT-95)onthelivercancercelllineHepG2．andtoexploreitspotentialmechanisms．MethodsThegrowthcurvesandthecytostaticeffectOfEI95ontheHepG2cellswereevaluatedbyMTTassay．ThemorphologicalchangesinHepG2

6、cellswereobservedbyopticalmicroscopes；EI95inducedcellapoptosisdeathonHepG2cellswasmeasuredbyHochest33258staining．TheeffectonexpressionsofCytochromeC(CytC、proteininHepG2cellsweredetectedbyWesternblot．Caspase．3andcaspase一9activitiesweremeasuredwithcaspaseactivityassaykit．Theinfectedcel

7、lswereexaminedforDNAfragmentationbyagarosege1electrODhOresis．ResultsMTTassayshowedthatEr．95wasabletoinhibittheHepG2cellsinadose—dependentmanner．Theconcentrationrequiredfor50％inhibition(IC50)was52．57g。mL一1．Themorphologicalchangesduetoapoptosisincluedeshrinkingofcellsandroundcellsunder

8、anopticalmic